肿瘤相关微量鞘糖脂的线性离子阱多级质谱分析方法研究

鞘糖脂影响肿瘤的发生和发展，但是鞘糖脂与肿瘤的关系研究，由于糖结构和脂结构的复杂性以及研究人员缺乏有效的分析方法，进展缓慢。传统鞘糖脂的结构研究方法需要大量的样本，提取分离纯化步骤多，易丢失微量成分；灵敏度低。根据鞘糖脂的结构特点，我们以N-乙酰水解酶双相水解，把脂部分分离出，应用GC-MS鉴定结构，再应用氟修饰分离，氢氘同位素异构体标记定量,多级质谱技术和糖异构体数据库为核心技术，构建糖的分析方法。近期我们应用线性离子阱质谱方法比较分析人肝细胞肝癌和癌旁组织，发现明显高表达岩藻糖化的一系列新鞘糖脂，还发现末端NeuAc2,6（3）Gal序列的酸性鞘糖脂，NKT细胞自身配体iGb3及其异构体在肝细胞肝癌中相对含量也明显高于癌旁组织，但是由于这几组鞘糖脂的离子分散，相对含量低，用传统方法无法解析出其准确的结构，因此适合做为模式组织样本来验证方法，同时也可为发现肝癌的新鞘糖脂生物标记奠定基础。

本项目按照计划进行，围绕标书的主题推进研究，用鞘糖脂对照品构建了线性离子阱多级质谱分析方法，解析了常见主要鞘糖脂的离子阱质谱裂解规律，完成鞘糖脂定性数据谱，结合氟修饰分离——氢/氘甲基化技术完成了定量分析方法学研究，并实际应用到肿瘤细胞系、临床肿瘤标本上，得到了有效的验证，目前通过肝癌组织样本的分析，发现了新颖的相关糖表位，进一步建立了血液样本的分析流程，同时扩展白血病、脑胶质瘤、乳腺癌等组织样本的分析，达到各种肿瘤都有广泛应用意义的标准。以通讯作者发表SCI论文4篇，申请发明专利1项，培养4名硕士获得硕士学位，5名在读硕士研究生，1名在读博士研究生。