微波消融激活肝癌CTL细胞抗肿瘤功能及相关机制研究

Microwave ablation (MWA) and immune therapy have become important means of treatment of liver cancer combined with conventional surgery, radiotherapy and chemotherapy treatment. Impact on immune function of MWA has gradually become one of the research hotspot. Previous studies have focused more on joint MWA explore DC on adoptive cell experiments, and for microwave ablation is activated immune cells in the patient's body and mechanism of destruction has been reported rarely.Our previous experiments have suggested that in liver cancer patients before MWA, the number and function of the killer lymphocyte cell were reducted, apoptosis increased , while inhibition of Treg cells appeared opposite trend. In the next we will establish the tumor-bearing animal model of hepatocellular carcinoma in situ,detected the number of CTL cell subsets ,related cytokine activity to explore the effects between microwave ablation and CTL cells and Treg cell number and function of the body and to discuss whether the microwave ablation affect the host immune function. Provide a theoretical basis for future microwave ablation combined with immunotherapy.

微波消融术（MWA）与传统手术、放化疗相结合的综合治疗已成为肝癌治疗的重要手段，而MWA对机体免疫功能的影响逐渐成为国内外研究的热点之一。以往研究重点多放在微波消融联合DC细胞过继实验的探讨上，而针对微波消融是否激活患者体内杀伤性免疫细胞及其机制鲜有报道。本课题组前期实验结果提示MWA前肝癌患者体内以CTL细胞为主的杀伤性淋巴细胞数量及功能减低、凋亡增加，而抑制性Treg细胞则出现相反趋势。接下来我们将设计动物模型来深入探讨MWA是否激活CTL细胞抗肿瘤活性及其相关机制，并在此基础上联合检测MWA 治疗后肝癌患者CTL细胞亚群及其相关细胞因子的动态变化，密切结合临床随访来评价影响患者预后的指标，以期发现MWA在原位灭活肿瘤组织的同时，是否能通过促进宿主免疫功能的恢复而进一步影响疗效。结果将不仅有助于我们更好地理解MWA 对机体免疫功能的影响，更有望为今后MWA联合免疫治疗提供理论依据。

本课题对肝癌MWA治疗前后机体免疫功能指标、肝功能指标及 AFP 的变化情况进行观察，从而评价其对肝癌患者储备功能及免疫功能影响，为今后微波消融联合免疫治疗打下理论基础。.方法：1.肝癌分为微波消融组、外科手术组。检测2组患者治疗前后外周血淋巴细胞亚群变化；比较治疗前后肝功能指标的变化。.2.以不同侵袭性肝癌细胞株为研究对象，检测不同肝癌细胞株表面趋化因子受体CCR4的mRNA与蛋白表达情况。.3.检测CCL22在肝癌组织、正常肝组织中的表达定位，分析其与临床参数的关系检测肝癌患者肿瘤组织及正常肝组织中Treg胞表面CCR4受体表达情况。 .4.分离肝癌患者外周血Treg细胞及正常人外周血CD8+T淋巴细胞，共培养实验分析Treg细胞对异体CD8+T细胞的作用。.5.利用膜外荧光团芘，评估DEN诱导肝癌模型中细胞膜粘度和流动性参数。.结果：.1.MWA治疗1周内，机体的细胞免疫功能明显改善优于外科手术治疗（P＜0.05）。.2. 肿瘤直径 5-10cm的块状型肝癌患者行MWA 治疗，术后肝功能的损害较重。.3. 高侵袭性肝癌细胞株中CCR4的m RNA 及蛋白水平表达明显高于低侵袭性肝癌细胞株及正常肝细胞株（P< 0.05）。趋化因子CCL22在肝癌组织中的表达高于正常肝脏组织（P< 0.05）。.4.肝癌患者TIL及正常肝组织中均有CCR4+Treg 细胞表达，肿瘤组织中CCR4+Treg细胞占Treg细胞相对百分含量高于正常肝组织差异具有统计学意义（P=0.0001）。 .5.肝癌患者外周血中新鲜分离的Treg细胞具有增加CD8+T淋巴细胞凋亡的特性，且与细胞数量有关。.6.DEN 处理后膜微粘度明显降低。与正常对照组相比，DEN 处理大鼠的准分子/单体比例和流动性参数明显增加。微波处理后，膜微粘度和流动性参数的变化明显恢复。.结论.1.治疗肝癌的方法中，对于细胞免疫系统功能的改善作用：MWA优于外科手术。 .2.肝细胞癌患者癌组织内高表达趋化因子CCL22，招募表达其受体CCR4的Treg细胞聚集在肿瘤微环境中。.3. Treg细胞对CD8+T淋巴细胞的负性调节作用是可引起其凋亡增加，该免疫学机制可能成为肝细胞性肝癌免疫治疗的新靶点.4.微波是非常有用的膜稳定调制参数。