基于内质网应激调控探讨针刀疗法抗膝骨关节炎软骨细胞凋亡的作用机制研究

The main pathological change of osteoarthritis is the degeneration of cartilage, and cartilage cell apoptosis in the process of cartilage degeneration plays a very important role. In recent years, from the biomechanical research to investigate the needle knife treatment of knee osteoarthritis mechanism systematically, and the research on needle knife anti apoptosis of the lack of in-depth system.This project in the endoplasmic reticulum stress caused by their particular cell apoptosis signaling pathways of theory basis, put forward the hypothesis that"regulating the endoplasmic reticulum stress response may be one of the mechanism of action of needle knife therapy intervention chondrocytes apoptosis".Study on regulation of endoplasmic reticulum stress response as the breakthrough point, through the establishment of knee osteoarthritis rabbit model, divided into the normal group, model group, the needle knife group, western medicine group, by using transmission electron microscope, RT-qPCR, Western Blot, the laser confocal technique, to observe and analyze the effect of needle knife therapy on knee osteoarthritis rabbit of synovial inflammation and cartilage cell apoptosis..From unfolded protein response and Ca2+ two start signal pathways, and the endoplasmic reticulum associated death (ERAD) signal pathway, system analysis discussed and elaborated the needle knife therapy regulation of endoplasmic reticulum stress intervention of knee cartilage cell apoptosis mechanism. To provide a scientific basis for the theory and teaching of needle knife therapy, promote the clinical application significance.

骨关节炎的主要病理改变是软骨退变，而软骨细胞凋亡又在软骨退变的过程中发挥着很重要的作用。近年从生物力学探讨针刀治疗膝骨关节炎作用机制的研究较为系统深入，而有关对针刀抗软骨细胞凋亡的研究缺乏深入系统。本项目在内质网应激引起细胞凋亡自身特有的信号通路的理论基础上，提出“调控内质网应激反应可能是针刀疗法干预软骨细胞凋亡的作用机制之一”的假说。研究以内质网应激反应调控为切入点，通过建立膝骨关节炎家兔模型，分设正常组、模型组、针刀组、西药组，运用透射电镜，RT-qPCR，Western Blot，激光共聚焦等技术方法，观察分析针刀疗法对膝骨关节炎家兔滑膜炎症及软骨细胞凋亡的效应。从未折叠蛋白质反应和Ca2+起始信号2条途径，以及内质网相关的死亡(ERAD)信号通路，系统分析探讨和阐述针刀疗法调控内质网应激干预膝骨软骨细胞凋亡的作用机制。为丰富针刀疗法的理论与教学提供科学依据，促进临床应用意义重大。

骨关节炎的主要病理改变是软骨退变，而软骨细胞凋亡又在软骨退变的过程中发挥着很重要的作用。近年从生物力学探讨针刀治疗膝骨关节炎作用机制的研究较为系统深入，而有关对针刀抗软骨细胞凋亡的研究缺乏深入系统。本项目探讨了针刀通过调控内质网应激反应保护膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用机制。.项目研究结果如下：.①采用改良Lequesne MG膝关节行为学评分，明确了针刀对KOA兔及大鼠局部体征及功能具有改善效应.②通过观察膝骨性关节炎病变模型兔及大鼠软骨组织形态及细胞超微结构的变化，发现针刀能明显改善软骨组织和细胞的形态.③TUNEL染色法研究结果表明针刀能减少膝骨性关节炎病变模型兔膝软骨细胞凋亡.④利用蛋白免疫印迹及实时荧光PCR技术检测内质网应激信号通路PERK-eIF2 α-CHOP，凋亡信号通路PI3K/Akt相关蛋白及mRNA在膝骨性关节炎模型兔体内的表达，证实了针刀能抑制PERK-eIF2 α-CHOP信号通路，激活PI3K/Akt信号转导通路，从而抑制内质网应激反应，调节下游靶蛋白以抑制软骨细胞凋亡并延缓软骨细胞衰老和变性。从而明确了针刀治疗膝骨性关节炎病变的作用靶点。.⑤利用［Ca2+］信号实时记录系统对原位软骨细胞内自发性的［Ca2+］信号进行记录与分析，探讨正常兔软骨和膝骨关节炎兔软骨中软骨细胞自发性［Ca2+］信号差异。运用激光共聚焦显微技术方法，证实了针刀通过调节Ca2+释放抑制Caspase家族的激活，干预软骨细胞凋亡。.本项目从未折叠蛋白质反应和Ca2+起始信号2条途径，以及内质网相关的死亡(ERAD)信号通路，系统分析探讨和阐述针刀疗法调控内质网应激干预膝骨软骨细胞凋亡的作用机制，为该疗法临床应用科学性提供依据，为临床治疗膝骨性关节炎提供新的思路和方法。