塔玛亚历山大藻单细胞微卫星标记分析及其在种群遗传学研究中的应用

赤潮生物种群遗传学是赤潮发生机制研究的重要内容。微卫星标记分析和单细胞PCR是赤潮生物种群遗传学研究的重要工具，但其自身都存在不足。通过全基因组扩增技术整合微卫星标记和单细胞PCR技术，建立单细胞微卫星标记技术是赤潮生物种群遗传学研究的方向。近年来，塔玛亚历山大藻导致我国黄渤海贝类麻痹贝毒严重超标，而对于该海域塔玛亚历山大藻种群遗传多样性、遗传结构、基因流等资料知之甚少。本项目拟以塔玛亚历山大藻为材料，开发基因组微卫星标记，建立微卫星标记分析方法；建立塔玛藻单细胞全基因组扩增方法，并以其为桥梁，整合微卫星标记分析和单细胞PCR技术，建立塔玛藻单细胞微卫星标记分析技术；搭载国家海洋局趋势性监测项目采集我国黄渤海塔玛藻，单细胞微卫星标记技术分析其种群遗传结构，提供我国黄渤海塔玛藻遗传多样性、种群遗传结构、地理种群间基因流等基础数据资料，为塔玛藻赤潮发生机制研究、赤潮监测提供技术支持和基础数据。

采用FIASCO（Fast Isolation by AFLP of Sequences Containing repeats site）方法富集、分离海洋有毒甲藻——塔玛亚历山大藻基因组DNA微卫星位点。测序分析的22个克隆中全部含有微卫星位点，插入片段大小为175-687bp，微卫星DNA的重复数最低4次，最高27次，平均11次；在全部的39个微卫星位点中，其中25个属于完美重复型，13个不完美重复型，1个复合型。设计合成塔玛亚历山大藻微卫星标记引物8对，其中6对引物能得到清晰的DNA产物条带。项目组采用TEM-PCR技术引物设计思路，针对这6个微卫星标记微点重新设计了PCR扩增引物，实现了单细胞塔玛亚历山大藻微卫星遗传标记的扩增。