PanIN-3期特异性miRNAs的鉴定及其在胰腺癌早期诊断中的作用及机制研究

缺少早期诊断的特异性分子标志物是导致胰腺癌预后差的根本原因之一，胰腺癌大多起源于胰腺上皮内瘤变（PanIN），特别是高级别的PanIN-3期。课题组前期研究初步发现，PanIN-3期组织、血/胰液中存在特异性miRNAs，推测它们有可能成为胰腺癌早期诊断的分子标志物。本项目拟利用人体胰腺切除标本和胰腺癌转基因小鼠模型，采用激光显微切割方法获取人和小鼠PanIN-3期病变和正常胰腺导管上皮组织，然后通过miRNA芯片分别筛查人和转基因小鼠PanIN-3期组织中差异表达的miRNAs，并分别在组织、血/胰液中进行验证，再经生物信息学分析和序列比对，获得人PanIN-3期特异性miRNAs，进一步利用miRNA靶基因预测软件预测其靶基因，并在细胞和动物水平探讨其调控机制，最后在200例人不同级别PanINs和不同阶段胰腺癌组织、血/胰液样本中进行检测与验证，旨在寻找用于胰腺癌早期诊断的分子靶标。

摘要 研究背景：胰腺癌是一种临床表现隐匿、进展迅速和预后极差的恶性肿瘤，而缺少特异性分子诊断标志物是其未能及时得以诊治的根本原因。研究显示，胰腺癌大多起源于胰腺导管上皮内瘤变（Pancreatic Intraepithelial Neoplasia, PanIN），特别是高级别上皮内瘤变PanIN-3期，因此，本项目旨在筛选和验证PanIN-3期及胰腺癌中特异性表达的miRNAs，为胰腺癌的早期诊断寻找新的分子标志物。内容和方法：本项目利用人体胰腺切除标本，查找病变组织中的高级别胰腺上皮内瘤变PanIN-3期和胰腺癌病灶，采用激光显微切割方法获取其中的PanIN-3期、胰腺癌和正常胰腺导管上皮组织，然后通过miRNA芯片筛查出PanIN-3期和胰腺癌组织与正常导管上皮组织中差异性表达的miRNAs，再在组织和血浆中进行验证。研究结果：共筛选出40余种差异性表达的miRNAs，其中表达上调的有24种，表达下调的有21种，然后采用实时定量-PCR和原位杂交方法进一步在胰腺上皮内瘤变PanIN-3期和胰腺癌病变组织和血浆中进行验证，最终获得8种有显著表达差异的miRNAs，其中表达上调的有5种：miR-21, miR-29a, mir-31, mir-101和mir-192，表达下调的有3种：miR-26a,miR-150和miR-1290，目前正对其在胰腺癌诊断和鉴别诊断中的价值作进一步的分析。我们还对其中的miR-26a和miR-150及其靶蛋白在胰腺癌中的表达及其意义进行了探讨。结论和意义：PanIN-3期和胰腺癌组织中有显著表达差异的miRNAs有8种，它们在胰腺癌的诊断和鉴别诊断中具有重要的价值。其中miR-26a和miR-150均是重要的胰腺癌抑制因子，miR-26a和miR-150及其靶蛋白Cyclin E2、c-Myc和MUC4均是胰腺癌新的诊断和预后判断的分子标志物。