从非酒精性脂肪肝不同典型证候的尿代谢物探讨证相关物质谱

"Syndrome biological basis" is one of the key scientific problems needed to be broken in traditional Chinese medicine. Based on previous study foundation and exploration, this study put forward hypothesis that syndromes (four diagnostic Information groups) exist corresponding to metabolites combination groups (spectrum). Typical gallbladder damp-heat syndrome and liver depression and spleen deficiency syndrome in patients with non-alcoholic fatty live disease (NAFLD) are treated as study subjects, occult syndromes(no symptoms for analysis) in patients with NAFLD and healthy volunteers are treated as control group, on the basis of four diagnostic information collection, urine metabonomic studies will be carried out with mass spectrometry (MS) combined with gas chromatography(GC/MS),liquid chromatography (LC/MS), urinary characteristic metabolic substances of different typical syndromes will be obtained. Syndromes information expression model and its corresponding to "metabolic substance combination groups (spectrum)" will be established by using syndrome mathematical models analysis techniques. On this basis, typical gallbladder damp-heat syndrome patients will be selected, danning tablet for the treatment of liver and gallbladder damp-heat syndrome of NAFLD will be treated as a carrier intervention, correlation analysis will be carried out betweent alteration of metabolic substance combination groups (spectrum) and syndromes changes before and after the intervention,and verify the validity of metabolic substance combination groups (spectrum). Hypothesis put forward by the applicant will be demonstrated ,and thus reveal the biological basis of TCM, and lay methodology foundation for syndrome objective evaluation.

"证候生物学基础"是中医学有待突破的关键科学问题之一。本课题基于既往研究基础和探索，提出"证（四诊信息群）存在相对应的'代谢物质组合群（谱）'的假说"。 拟以非酒精性脂肪肝（NAFLD）典型的肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者为研究对象，以NAFLD隐证型（无证可辨）患者及健康志愿者为对照，在四诊信息收集基础上，运用 GC/MS和LC/MS技术进行尿代谢组学检测分析，获得不同典型证候的尿特征性代谢物。运用证候数理模型分析技术分别建立中医证候信息的表达模型及与之相应的"代谢物质组合群（谱）"。在此基础上，选择典型的肝胆湿热证患者，以临床用于NAFLD肝胆湿热证的胆宁片作为干预的载体，进行干预前后"代谢物质组合群（谱）"变化与证候变化的关联性分析，验证"代谢物质组合群（谱）"的有效性，以期论证申请者提出的假说，从而揭示中医证的生物学基础，并为证的客观评价奠定方法学基础。

课题围绕 “证（四诊信息群）存在相对应的‘代谢物质组合群（谱）’的假说”，以非酒精性脂肪肝（NAFLD）典型的肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者为研究对象，以NAFLD隐证型（无证可辨）患者及健康志愿者为对照，在四诊信息收集基础上，运用 GC/MS技术进行尿代谢组学检测分析。运用证候数理模型分析技术分别建立中医证候信息的表达模型和相应代谢物质谱。在此基础上，典型的肝胆湿热证患者给予胆宁片干预，采集四诊信息、尿液等信息，并进行数据处理和尿代谢物的检测，根据前述获得的证候诊断模型，预测证候的变化。. 课题实施进展顺利，完成了任务书中NAFLD不同典型证候患者尿代谢物研究，NAFLD不同典型证候“四诊信息群”及其相关的尿代谢物质谱的研究以及证候数理模型的验证实验。获得以下研究结果：（1）基于SIMCA-P11.5软件，采用监督分析法-0PLS建模，结果不同典型证候的尿液代谢谱区分良好，获得了不同典型证候的尿液特征性代谢物；(2) 在线系统– MetaboAnalyst中进行代谢通路的分析，获得了不同典型证候的尿液特征性代谢通路；（3）采用证候数理模型分析技术分别建立了：基于中医四诊信息证候判别式，基于代谢物的中医四诊证候判别式以及基于四诊信息和代谢物的联合证候判别式；（4）根据前述获得的证候诊断模型，预测证候的变化，结果三种证候判别式预测正确率分别为83.16%、74.74%和86.32%，比较预测的正确率，基于四诊信息和代谢物的联合证候判别模型正确率最高。. 研究获得以下主要结论：（1）本研究获得了一种创新的评价和诊断中医证的手段与方法，即基于中医证候的四诊信息和尿代谢物的联合证候判别模型。(2) 本研究证实，中医的“证”，有一定的生物学基础，证（四诊信息群）存在相对应的‘代谢物质组合群（谱）。(详见研究报告)。. 项目研究工作顺利完成，达到预期目标。已发表标注论文7篇（其中SCI收录2篇）,1篇文章已接受（SCI收录)；参加学术会议4次，并作了口头交流；培养研究生2名。研究证实了中医的“证”，有一定的生物学基础，研究为证的客观评价奠定了方法学基础。