基于体内过程的酒制大黄缓和泻下和酒制升提药性研究

Radix et rhizoma rhei is the representative of offensive precipitating traditional Chinese medicine, if it was processed with wine and after which whose drug property undergoes a significant change, particularly in mitigated lapactic effect and the effects for ascending after wine processed. For the past few years, researches were typically focused on chemical analysis and pharmacological activities while studies concerning in vivo process or function mechanism are relatively weak. Our group has launched tentative investigation and found that pharmacokinetic properties and tissue distribution of principle components in wine-processed rhubarb vary a lot from those in crude rhubarb (unprocessed), so does their interactions with intestinal flora; as to the influence on drug metabolizing enzyme, inhibition effect of crude rhubarb was unexpectedly swich to induction effect after wine-processing. For further in-depth understanding the nature of drug property changes, our project, based on the analysis of in vivo process about principle components (anthraquinone and tannin) before and after wine-processing, is meant to compare wine-processed rhubarb (wine rhubarb and stewed rhubarb) with crude rhubarb in terms of pharmacokinetics on pathological (with constipation and heat-syndrome) rats, tissue distribution and their influence on intestinal floras and drug metabolizing enzymes, afterwards, this project experimentally provides valuable data for better explaining drug nature change of wine-processed rhubarb and for enhancing medication safety, also does it act as a reference for modern understanding the wine-processing-theory of traditional Chinese medicine.

生大黄苦寒沉降，泻下力强，酒制后药性发生了明显改变，可缓和泻下、酒制升提和增强活血化瘀功能。近年来研究者围绕酒制大黄化学成分和整体活性已经做了很多有价值工作，但基于体内过程的研究仍较薄弱。本课题组在此方面进行了探索，结果表明肠道菌群在大黄泻下成分的体内转化中起到了重要作用，并发现熟大黄主要成分（如大黄素）在模型与健康大鼠体内的组织分布有明显区别，在对部分药物代谢酶的影响上甚至出现了与生品抑制相反的诱导作用等。为更深入认识酒制大黄的药性特点，本项目在分析大黄经酒制前后主要活性成分（蒽醌和鞣质）的基础上，进行酒制大黄（酒大黄和熟大黄）与生大黄在健康和模型（便秘和发热）动物体内不同环节（与肠道菌群相互作用、药动学和组织分布，以及对部分药物代谢酶影响）的比较研究。本项目结果将为更全面和深入揭示酒制大黄的药性特点及增强用药安全性提供实验数据支持，也为中药传统酒制理论的现代实验研究提供方法学参考。

本项目采用基于体内分析的方法，进行了大黄经酒制后（酒大黄和熟大黄）对部分药物代谢酶、胚胎毒性以及肠道菌群的影响研究。首先，本项目用HPLC方法分析了不同酒制大黄的化学成分（蒽醌类和鞣质类），图谱表明酒制后大黄的某些化学成分发生了明显改变；其次，本项目用HPLC和LC-MS/MS分别建立了同时测定四种CYP450酶探针、底物及其代谢物的分析方法，方法学验证结果表明可用于酒制大黄对CYP450酶的影响研究。第三，本项目在体内外进行了酒制大黄对大鼠CYP450四种亚型酶探针底物的药动学影响研究，结果表明熟大黄可以明显影响CYP3A1的体内活性，而酒大黄则基本无影响，但其对CYP2A1有一定影响；第四，本项目建立了UPLC-MS/MS测定化学药物沙格列汀的分析方法，并进行了酒制大黄对其在大鼠体内的药动学影响研究，结果表明熟大黄确实可以通过影响CYP3A1的活性来影响部分化学药物的体内过程；第五，本项目进行了酒制大黄对斑马鱼胚胎发育的安全性实验研究，结果表明大黄经酒制后，酒大黄的胚胎毒性有了明显增强，而熟大黄的毒性则相对较小。第六，本项目进行了大黄与肠道菌群的相互影响研究。综上所述，大黄经酒制后，在对药物代谢酶的影响方面有很大区别，在与其他化学药物（或某些受到代谢酶影响的中药）联用时需要特别注意；酒制后大黄在胚胎毒性方面也有明显变化，本项目建议增加对酒大黄的“孕妇禁用”标注；大黄对肠道菌的影响也比较明显。. 在项目成果方面，本项目已经发表SCI论文3篇，分别发表在Bioanalysis（IF 3.25）、Journal of Ethnopharmacology（IF 2.75）和Biomedical Chromatography（IF1.96）上；被接收中文核心期刊论文1篇（时珍国医国药，校稿已完成）；有关酒制大黄对斑马鱼胚胎毒性的研究论文获得2013年中华中医药学会中药分析分会第六次年会优秀论文二等奖。此外，参与国内会议6次/9人次，在大会作报告2次。已毕业硕士研究生1名，在读研究生1名。