hTERT、EGFR在UBE2D3调节食管癌放疗敏感性机制中的作用

Radioresistance is still the main problem in the radiation therapy of Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). Our previous results indicated that UBE2D3 interacts with hTERT and EGFR, and the expression status of UBE2D3 is relative with the ESCC radiosensitivity and its prognosis. So We speculate that hTERT, EGFR may be involved in the process of UBE2D3 mediated radiosensitivity of ESCC. In order to reveal the role and molecular mechanisms underlying UBE2D3 regulating radiosensitivity in ESCC, firstly, the project will be based on the clinical ESCC samples and evaluate the relationship between UBE2D3, hTERT, EGFR and efficacy prognosis. Secondly, we will investigate the potential role that ubiquitin conjugating enzymes UBE2D3 regulates the ubiquitination levels of hTERT and EGFR, as a key ionizing radiation target, which mediated the telomerase activity and capacity of DNA damage and repair, resulting in regulation of the radiotherapy sensitivity on the molecular, cellular level. In addition, animal model would be established to detect the indicators and explore the mechanisms of UBE2D3, hTERT and EGFR in process of the ESCC radiosensitivity. Furthermore, exploring its potential value as a radiation sensitizer targets while providing a new reference for the development of ESCC radiation therapy strategies.

放疗抵抗是食管癌放射治疗中面临的主要难点。我们前期结果提示：泛素交联酶UBE2D3与hTERT、EGFR相互作用，UBE2D3的表达状态与食管鳞癌细胞的放疗敏感性调节及其预后有关，我们推测hTERT、EGFR可能参与UBE2D3介导的食管鳞癌的放疗敏感性的调控过程。为了进一步揭示UBE2D3调控食管鳞癌放疗抵抗效应的相关机制，本项目拟在前期基础上，首先结合临床食管鳞癌样本，评价UBE2D3、hTERT、EGFR三者参与食管鳞癌预后的效能关系；其次在分子、细胞层面分析UBE2D3通过调节hTERT和EGFR的泛素化，介导DNA损伤修复，进而参与放疗敏感性调节的作用和分子机制；在动物模型中通过对移植瘤相关指标的检测，探究hTERT、EGFR在UBE2D3调节食管癌放疗敏感性中的作用，以期在探索其作为放疗增敏靶点的潜在价值的同时，为发展食管癌放射治疗策略提供参考。

放疗抵抗是食管癌放射治疗中面临的主要难点。我们前期结果提示:泛素交联酶UBE2D3与hTERT、EGFR相互作用，UBE2D3的表达状态与食管鳞癌细胞的放疗敏感性调节及其预后有关，我们推测hTERT、EGFR可能参与UBE2D3介导的食管鳞癌的放疗敏感性的调控过程。通过过表达UBE2D3的食管癌稳定细胞株EC109，联合X射线，研究干扰UBE2D3对食管癌细胞端粒长度、端粒酶活性、细胞周期、细胞凋亡、DNA损伤修复等表型的检测，以探索UBE2D3调控肿瘤放射敏感性的可能机制。利用生物信息学分析TCGA数据库里UBE2D3 基因在306例食管癌和13例食管正常组织的表达量差异，在306例肿瘤样本中不同分期的表达量差异及表达量与患者预后的相关性，明确UBE2D3与食管癌的发生发展及预后的关系，在体外、体内实验验证UBE2D3的调控肿瘤的新机制。根据生物信息学分析，对UBE2D3敲除后的细胞，通过提取RNA进行转录组测序分析发生变化的基因及富集的通路，发现Her3基因转录水平发生变化，且与P53基因存在相关性，Her3基因与EGFR基因是一个家族基因，分析其可能是潜在的调控靶标，预测其作用机制（尤其是与P53、端粒稳定性相关的机制研究），通过研究UBE2D3敲除后的Her3转录水平变化，分析在这个过程中表达发生变化的P53，进行mRNA靶标预测，根据mRNA靶标的变化水平，预测其作用机制。以期在探索其作为放疗增敏靶点的潜在价值的同时，为发展食管癌放射治疗策略提供参考。