人肌型肌酸激酶与相关蛋白质的相互作用研究

肌酸激酶是细胞能量代谢的关键酶，参与了很多重要的生理过程。以往国际.上对于肌酸激酶的研究主要集中于它的自身性质，而对于这种重要的酶如何通过蛋白质相.互作用发挥生理功能以及如何受到其他蛋白质的调控研究较少。本项目拟通过酵母双杂交.实验建立以人肌型肌酸激酶为中心的蛋白质相互作用网络，通过免疫共沉淀、GST-pulldown 等手段确证这些蛋白质与肌酸激酶的相互作用。同时对其中3 种相互作用蛋白进行细致研究，利用mapping 和酵母双杂交实验中的提示信息找到相互作用结构域，分析这些相互作用的共性与差异，另外通过设计功能实验阐明这些相互作用的具体生理意义。目前我们已经完.成了酵母双杂交实验，筛到了9 种可能的相互作用蛋白质，我们已经验证了其中三种蛋白.质MyBPC-1，MT2A 和CC2D1B 与肌酸激酶的相互作用，本项目的研究将揭示相互作用结构域、.生理功能及作用机制。

肌酸激酶在细胞能量代谢中发挥着重要的作用,之前国际上对于这种关键酶如何通过蛋白质相互作用发挥生理功能以及如何受到其他蛋白质的调控等方面研究较少。本项目通过酵母双杂交实验建立了以人肌型肌酸激酶为中心的蛋白质相互作用网络，并通过免疫共沉淀、GST-pulldown 等手段确证这些蛋白质与肌酸激酶的相互作用，这一工作尚未见报道。在本研究中我们已经通过酵母双杂交实验筛到了9种可能的相互作用蛋白质，对其中3种进行细致研究，并重点研究MyBPC-1和MT2A与CK的相互作用，利用mapping和酵母双杂交实验中的提示信息找到相互作用结构域，分析这些相互作用的共性与差异，再通过比较相互作用界面找出CK与其它蛋白相互作用的结构基础，之后又通过功能实验阐明这些相互作用的具体生理意义。长期以来大家对于肌酸激酶的催化机制研究较为清楚，但是关于肌酸激酶在存在无数蛋白大分子有机体系的体内如何发挥作用却较为模糊，因此本项目的研究对于今后肌酸激酶的代谢调控和功能发挥的基础研究和应用开发都具有较好的指导意义。