电压依赖性阴离子通道在难治性癫痫线粒体途径凋亡和耐药形成中的作用

难治性癫痫耐药的最初研究思路来源于肿瘤耐药，而最新肿瘤耐药研究发现凋亡可能参与其中。我们前期通过亚细胞蛋白质组学研究发现，难治性癫痫大鼠海马线粒体异常及外膜蛋白电压依赖性阴离子通道（VDAC）的差异表达，VDAC在调节细胞代谢及凋亡等过程中发挥重要功能，推测其可能参与了痫性发作后线粒体介导的凋亡与耐药的形成。.我们利用原代海马癫痫神经元模型和电刺激点燃杏仁核苯妥英钠筛选难治性癫痫大鼠模型，通过阻滞VDAC通道和构建VDAC载体转染神经元，并增加凋亡信号蛋白（Bcl-2和Bax）的干预，检测不同时间点线粒体改变、神经元凋亡、癫痫神经元放电和癫痫大鼠行为的改变，探讨VDAC在难治性癫痫线粒体凋亡途径和耐药形成中的作用，以期寻找难治性癫痫神经元保护的新途径和治疗的新靶点。

背景：难治性癫痫耐药的最初研究思路来源于肿瘤耐药，而最新肿瘤耐药研究发现凋亡可能参与其中。我们前期通过亚细胞蛋白质组学研究发现，难治性癫痫大鼠海马线粒体异常及外膜蛋白电压依赖性阴离子通道（VDAC）的差异表达，VDAC在调节细胞代谢及凋亡等过程中发挥重要功能，推测其可能参与了痫性发作后线粒体介导的凋亡与耐药的形成。.方向：1.建立原代海马癫痫神经元模型和电刺激点燃杏仁核苯妥英钠筛选难治性癫痫大鼠模型;2.通过阻滞VDAC通道和构建VDAC载体转染神经元，并增加凋亡信号蛋白（Bcl-2和Bax）的干预，检测不同时间点线粒体改变、神经元凋亡、癫痫神经元放电和癫痫大鼠行为的改变。.研究内容：1.建立体外癫痫模型和杏仁核电刺激点燃PHT筛选难治性癫痫大鼠模型，检测癫痫发作后不同时间点神经元凋亡，线粒体内和胞浆中CytC的变化、胞浆中Caspase含量和活性改变VDAC和Bcl-2家族蛋白表达的改变；2.通过阻滞或增加VDAC，并通过改变Bcl-2家族蛋白，观察癫痫神经元的凋亡、大鼠痫性行为和脑电的影响。.重要结果及关键数据：1.癫痫海马神经元及难治性癫痫大鼠可监测到与线粒体VDAC相关的神经元凋亡；2.线粒体VDAC介导的凋亡受Bcl-2家族蛋白表达的影响；3.阻滞VDAC可导致凋亡减少和癫痫放电的恢复。.科学意义：1.首次在体外癫痫模型和难治性癫痫大鼠海马线粒体检测到VDAC的改变；2.通过动物模型中对VDAC的干预，结合细胞水平实验结果，动态监测癫痫脑电、行为和耐药性的改变。