蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素基因的细胞定位和功能

贾第素是蓝氏贾第鞭毛虫所特有的细胞骨架蛋白，种类繁多，功能复杂。其中α-8 贾第素是参与贾第虫吸附宿主肠上皮细胞并导致腹泻的主要功能蛋白，其细胞定位和功能尚不清楚。本研究拟从课题组首次在国内分离并纯培养的贾第虫C2株入手，在先期初步克隆α-8贾第素基因的基础上，进一步优化条件，构建其原核或真核表达载体，以表达产物为抗原制备单克隆抗体，经金标记后作用于对数期的C2株，免疫电镜观测其在贾第虫滋养体细胞内的分布，进而明确α-8 贾第素在细胞内的定位。同时，利用准确性高、重现性好的核酶切割技术，构建贾第虫病毒核酶载体，对α-8贾第素mRNA进行不同时间、强度的切割，实现对该基因表达的抑制或定量调节，从而揭示α-8贾第素在细胞内的分布情况与功能。为原始真核细胞生物细胞骨架蛋白的深入研究、抗贾第虫药物新靶点的筛选奠定理论和技术基础。

1、 摘要：.背景及主要内容.贾第素是蓝氏贾第鞭毛虫所特有的细胞骨架蛋白，种类繁多，功能复杂。其中α-8 贾第素是参与贾第虫吸附宿主肠上皮细胞并导致腹泻的主要功能蛋白，其细胞定位和功能尚不清楚。本研究拟从课题组首次在国内分离并纯培养的贾第虫C2株入手，在先期初步克隆α-8贾第素基因的基础上，进一步优化条件，构建其原核或真核表达载体，以表达产物为抗原制备单克隆抗体，经金标记后作用于对数期的C2株，免疫电镜观测其在贾第虫滋养体细胞内的分布，进而明确α-8 贾第素在细胞内的定位。同时，利用准确性高、重现性好的核酶切割技术，构建贾第虫病毒核酶载体，对α-8贾第素mRNA进行不同时间、强度的切割，实现对该基因表达的抑制或定量调节，从而揭示α-8贾第素在细胞内的分布情况与功能。为原始真核细胞生物细胞骨架蛋白的深入研究、抗贾第虫药物新靶点的筛选奠定理论和技术基础。.重要结果.按项目计划完成了贾第虫C2株的纯培养、复苏、传代。基因组DNA抽提。α-8贾第素基因PCR扩增，构建重组质粒，获得重组蛋白及蛋白鉴定。完成了α-8贾第素特异性抗体的制备，通过免疫电镜和免疫荧光方法明确了α-8贾第素的细胞定位，并构建了贾第虫病毒核酶载体。通过核酶载体抑制α-8贾第素的表达，鉴定了α-8贾第素的生物学功能。为原始真核细胞生物细胞骨架蛋白的深入研究、抗贾第虫药物新靶点的筛选奠定了理论和技术基础。.拓展的工作.此外，我们还完成了α-4、α-7.1、α-11贾第素的原核表达，及α-4贾第素的细胞内定位。为原始真核细胞生物细胞骨架蛋白的深入研究奠定了扎实理论和技术基础。本研究团队还对贾第虫的染色体结构和有丝分裂进行了电镜观察，结果显示，贾第虫在有丝分裂过程中存在典型的凝集染色体，染色体的数目为2n=10条；1 号染色体为亚中央着丝粒染色体, 2 号、3 号、4 号、5 号为端着丝粒染色体，填补了形态学研究的空白。.本项目完成过程中，共培养博士生1人，硕士研究生5人。年轻教师2人，技术员1人。年轻教师获得“河北省自然科学基金1项”；“唐山市科技攻关项目4项”；获得“河北省科技进步”三等奖1项；“唐山市科技进步”二等奖2项。发表期刊论文11篇，其中SCI收录2篇。