视网膜血管内皮细胞周期调控与糖尿病视网膜病变发生发展关系的研究

糖尿病视网膜病变是全球性严重致盲眼病，随着糖尿病发病率逐年增高，其防治形式日益严峻。视网膜血管内皮细胞是糖尿病视网膜病变发生发展过程中的中心环节，而细胞周期启动是血管细胞增殖的必经途径。我们拟在前期工作基础上，首次提出以细胞周期调控作为切入点，通过比较正常成体视网膜及糖尿病视网膜中细胞周期调控因子的时空表达，阐明包括细胞周期蛋白(Cyclin A-D)、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK1-6）及细胞周期蛋白依赖激酶抑制物（CDKN1A-C，CDKN2A-D）等细胞周期调控因子在维持视网膜血管内皮细胞正常表型及血视网膜屏障功能中的作用，明确组织或细胞特异性的细胞周期调控因子，阐明其在糖尿病视网膜血管损害过程中的作用。深入研究其作用机制，寻找创伤修复过程中起促进或抑制作用的关键因子，通过对其调控保护糖尿病视网膜病变所致的视网膜血管损害，为糖尿病视网膜病变治疗提供新的靶点。

糖尿病视网膜病变是严重的糖尿病并发症之一，已经成为最常见的致盲原因。由于内皮细胞位于血管壁的最内层，血糖升高最早损伤血管内皮细胞。 新生血管增殖是糖尿病视网膜病变进展至增殖期的标志，血管内皮细胞的分裂增殖是新生血管形成的基础，因此血管内皮细胞周期的调节必定涉及于这一过程中。.细胞周期调节蛋白主要包括细胞周期蛋白(cycliins)、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（CKIs）。其中，Cip/Kip家族隶属于CKIs，包括p21cip1、p27kip1和p57kip2三个蛋白。本研究首次描述了人视网膜微血管内皮细胞中Cip/Kip家族蛋白的表达状况，仅检测到p21cip1和p27kip1蛋白表达于人视网膜微血管内皮中。首次发现高糖干预48h可导致HRECs中p21cip1蛋白水平下降，但对其mRNA和p27kip1的蛋白水平无影响。从而将p21cip1引入到糖尿病视网膜病变的发病过程中。首次发现不同浓度的胰岛素对HRECs中p21cip1蛋白及mRNA表达水平的影响不同，低浓度胰岛素可促进p21cip1表达，高浓度胰岛素可抑制p21cip1表达，但对p27kip1表达水平无影响。提示胰岛素抵抗和强化胰岛素治疗过程中，高血清胰岛素水平对视网膜的潜在危害。伴随着p21cip1蛋白水平下降，HRECs表现为细胞周期推进，细胞存活率下降，提示在增殖性糖尿病视网膜病变中p21cip1对人视网膜内皮细胞潜在的保护作用。.本研究中，我们通过对人视网膜细胞分离培养建立糖尿病体外实验模型，在这一过程中我们改良了视网膜血管内皮细胞培养方法，并发现了一种新型的视网膜胶质细胞。并从表观遗传学及炎症角度探讨了5-氮杂胞苷、曲古抑菌素、白介素-4及褪黑素在糖尿病视网膜病变发生与发展过程中对视网膜血管内皮细胞潜在的治疗及保护作用。