延边地区人群叶酸代谢酶基因多态性检测及其靶向miRNA对缺血性卒中易感性的调控作用

Plymorphism in the folic acid metabolic gene is related with the susceptibility of ischemic stroke(IS), but its gene polymorphism has local and the race difference. miRNA participates in Hcy formation through regulate folic acid metabolism enzyme, but its regulative function on susceptivity of IS is unclear. This study will use case of illness - comparison research technique examines folic acid metabolism enzyme MTHFR, MTRR and the MTR gene polymorphism of korean , Chinese IS patient and healthy control group in the Yanbian area using fluorescence quota PCR , and examinate the blood plasma folic acid, the Vitamin B12 level and the blood plasma entire genome team DNA methylation condition, discusses the relation between MTHFR, MTRR and the MTR gene polymorphism , the DNA methylation , the blood plasma folic acid and the Vitamin B12; analysis the influence of various genes and the environment exposition factor, between the gene - nutrient, the gene - gene correlation on the IS susceptivity.Using the biological information study unifies miRNA chip technology screening and the appraisal folic acid metabolism enzyme target approaches miRNA, and discusse regulative function of pair target miRNA to the IS susceptivity. Thiis study may provides the scientific basis for determining susceptibility of IS, to forecast the individual morbidity risk and the formulation early time preventing and controlling measure.

叶酸代谢酶基因多态性与缺血性脑卒中（IS）易感性相关，但其基因多态性存在地区和种族差异。miRNA通过靶向调控叶酸代谢酶参与Hcy的形成，但是叶酸代谢相关miRNA及其结合靶点对IS易感性的调控作用尚不清楚。本课题利用病例-对照研究方法，首先应用荧光定量PCR检测延边地区朝汉IS患者和健康对照组叶酸代谢酶MTHFR、MTRR及MTR 基因多态性，检测血浆叶酸、维生素B12水平和血浆全基因组DNA甲基化状态，探讨MTHFR、MTRR及MTR基因多态与DNA异常甲基化及血浆叶酸和维生素B12的关系；在此研究基础上，分析各基因与环境暴露因素、基因-营养素、基因-基因之间交互作用对IS易感性的影响。其次，生物信息学方法结合miRNA芯片技术筛选和鉴定叶酸代谢酶靶向miRNA，探讨配对的靶向miRNA对IS易感性的调控作用。为确定IS的易感人群，预测个体发病风险和制定早期防治措施提供科学依据。

脑卒中是严重危害人类健康的疾病，是重要的致残和死亡原因。IS是多基因和环境因素相互作用，导致基因表达调控失衡，继而以动脉粥样硬化为主要表型的复杂疾病；其分子基础可能是多个基因的单核苷酸多态(single-nucleotide polymorphisms, SNPs)及其特定组合的累积效应对某些环境因子作用的易感性。高同型半胱氨酸血症是脑血管病的独立危险因素，而高同型半胱氨酸代谢相关酶的基因多态性可能会引起相应的酶缺陷或活性下降。本研究利用病例-对照研究方法，结合分子流行病学的手段，延边地区朝汉人群中探讨环境和民族因素、叶酸代谢酶基因多态性、DNA异常甲基化间的联系及其在缺血性脑卒中发生、发展中的作用。并在此基础上拟筛选叶酸代谢酶靶向miRNA对缺血性脑卒中易感性的调控作用。通过本课题的研究（1）我们建立了延边地区朝鲜族和汉族脑卒中患者数据库，制定了统一的调查表记录一般特征，饮食习惯、吸烟、饮酒等环境因素的调查；收集患者和对照组的静脉血液。（2）采用PCR-RFLP方法，证实了MTHFR基因C677T和A1298C基因多态性是延边地区脑卒中的独立危险因素；MTHFR C677T多态性与延边地区汉族脑卒中易感性可能有关；MTHFR A1298C多态性与延边地区朝鲜族脑梗死易感性可能有关；MTHFR C677T和A1298C突变可发生协同作用对脑卒中造成进一步不良作用；脑卒中患者中MTHFR C677T多态性分布存在民族差异。（3）利用基因测序方法，证实了MTRR基因66位A突变为G在人群中很常见，但是MTRR基因A66G多态性与脑卒中患病率无关；脑卒中患者中MTRR A66G多态性分布存在地区差异性和民族差异性；MTHFR C677T和A1298C二者与MTRR A66G联合突变对脑梗死的发生无加强作用。（4）基因组DNA低甲基化可增加脑梗死易感性；MTHFR基因C677T位点单核苷酸多态性影响基因组DNA甲基化水平；MTHFR基因A1298C位点单核苷酸多态性对基因组DNA甲基化水平无影响（5）本研究利用miRNA测序、生物信息学分析等方法，筛选和分析循环血中miRNAs与脑卒中的关系，试图探讨叶酸代谢酶为靶点的miRNA在脑卒中易感性的影响，但是未能筛选出差异表达的miRNA。