量子点标记特异性鳞癌细胞角蛋白抗体探针检测口腔鳞癌早期淋巴结转移的活体荧光成像研究

口腔鳞癌是常见的头颈部恶性肿瘤，颈淋巴结转移是其主要的转移方式，达30-69%，且隐匿性转移率较高，由于目前对CN0患者缺乏精确的诊断方法和依据，在临床上常造成不彻底治疗或过度治疗，降低了患者治疗后的生存率和生存质量?该研究拟探索一种能早期精确判断淋巴结转移的诊断及定位方法，并据此制定出合理有效的功能性外科治疗方案?本课题组多年来一直从事口腔癌转移机制和途径的研究，初步筛选了口腔鳞癌特异性细胞角蛋白单克隆抗体，建立口腔鳞癌特异性细胞角蛋白单克隆抗体（Lck4），拟采用基因工程技术进一步制备单链抗体（ScFv），并利用CdSe /ZnS 核壳型量子点标记、构建量子点- ScFv特异性荧光抗体探针，建立口腔鳞癌裸鼠移植瘤及淋巴结转移模型，进行口腔鳞癌活体内荧光显像，实现肿瘤原发灶及淋巴结转移的准确诊断及精确定位，从而为口腔鳞癌的早期诊断、精确手术切除范围提供一种极具前景的新途径。

舌鳞癌及前哨淋巴结近红外荧光活体成像的实验研究.口腔鳞状细胞癌是头颈部常见的恶性肿瘤，而舌鳞状细胞癌多年来一直位于口腔鳞状细胞癌中发病率的第一位，且易早期即出现颈淋巴结转移，常引起严重的口腔颌面畸形及功能障碍并威胁患者生命，早期准确诊断舌癌及淋巴结转移是提高舌鳞癌患者生存率和生存质量的关键因素。.方向：运用荧光活体成像技术，了解近红外荧光材料量子点Qdot800和Alexa680染料及其标记的尼妥珠单克隆抗体在舌鳞癌活体非侵入性诊断、定位及前哨淋巴结（sentinel lymph node，SLN）示踪中的研究价值。.主要内容：利用近红外荧光材料量子点Qdot800和Alexa680染料分别标记尼妥珠单克隆抗体，观察其对固定的人舌鳞癌细胞系Tcca8113及其活细胞的标记情况，建立Tcca8113舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤动物模型，将两种标记材料经尾静脉注射后经小动物活体成像系统进行荧光成像，观察其对活体内肿瘤的靶定和显像。研究还将Qdot800和Alexa680染料分别注射于裸鼠及兔的舌部，进行荧光成像后观察两种材料对舌SLN的示踪效果。.重要结果及关键数据：近红外荧光材料量子点Qdot800和Alexa680染料都能成功的与尼妥珠单克隆抗体偶联，偶联物对固定的人舌鳞癌细胞系Tcca8113及其活细胞的标记效率高，荧光强，MTT试验表明两种偶联物都对Tcca8113细胞生长抑制作用明显，Qdot800标记的尼妥珠单克隆抗体不能在活体内靶定舌鳞癌移植瘤，但Alexa680标记的尼妥珠单克隆抗体能在活体内靶定舌鳞癌移植瘤，靶定后呈现明亮的荧光，与周围正常组织形成明显对比。Qdot800和Alexa680都对动物模型的舌前哨淋巴结示踪效果良好，能在活体内清楚地显示舌部注射后引流的颈部前哨淋巴结位置，但Qdot800 较Alexa680的荧光强度高、持续时间长，且长时间停留于SLN内。.科学意义：近红外荧光材料量子点Qdot800和Alexa680染料都能标记尼妥珠单抗，制备成的荧光抗体探针在体外都可以靶定Tcca8113细胞，Qdot800不能在活体内靶定肿瘤成像，而Alexa680活体内靶定肿瘤且荧光成像效果好，两种材料都能进行舌前哨淋巴结的示踪，但Qdot800 较Alexa680更适于SLN示踪研究。Alexa680染料标记的尼妥珠单抗可作为活体分子导航手术的崭新方法。