受体酪氨酸激酶RON介导胰腺癌细胞侵袭性转移的病理机制

Pancreatic cancer is a digestive malignant tumor characterized by insidious onset, rapid growth and early metastasis. Invasive metastasis is the major cause of death, especially hepatic metastasis with over 50% incidence. So far, the mechanism of invasive growth and metastasis of pancreatic cancer cells remains unclear. Our recent research shown that the abnormal expression and function of receptor tyrosine kinase RON was a key factor in the invasion and metastasis of pancreatic cancer cell, while the conducted pathway was the biology prerequisite of highly invasive cell formed. Therefore, the the role of RON in cancer cell invasive growth will be explained systematically used the in situ and hepatic metastasis of pancreatic cancer as a model in this subject. The purpose is to clarify: ① the expression and invasive effect of RON and its oncogenic variants in pancreatic cancer; ② the mechanism of signal transduction and its key links of RON and its oncogenic variants mediated invasive growth of pancreatic cancer cell; ③ the effectiveness and the biology mechanism of specific anti-RON monoclonal antibody in inhibition the invasive growth and hepatic metastasis of pancreatic cancer cells. It has an important theoretical and practical values of this subject in clarifying the molecular mechanism of the invasive growth and hepatic metastasis of pancreatic cancer cells, verifying the feasibility of RON to be an anti-cancer drug target, and development of new anti-pancreatic cancer biopharmaceuticals.

胰腺癌是一种起病隐匿、生长迅速并以早期转移为特征的消化系统恶性肿瘤。侵袭性转移是其致死的主要原因，尤其是肝转移发生率超过50%。胰腺癌细胞侵袭性转移的机理仍不清晰。前期研究表明，受体酪氨酸激酶RON的表达和功能异常，是胰腺癌细胞形成侵袭性生长表型促进组织转移的一个关键因素，其传导的信息途径是形成高度侵袭性细胞的生物学前提。因此，本课题将以胰腺癌的原位和肝转移为模型，系统地阐述RON在癌细胞侵袭性转移中的作用，目的是阐明：①RON及其致癌型变异体在胰腺癌组织中的表达状态和侵袭性效应；②RON及其致癌型变异体介导胰腺癌细胞侵袭性生长的信息传导机理及其关键环节；③特异性抗RON单克隆抗体在阻碍胰腺癌细胞侵袭性生长和肝转移中的有效性及生物学机理。本项目的实施，对于阐明胰腺癌细胞侵袭性生长和肝转移的分子机理、验证RON作为肿瘤药靶的可行性、研制新型抗胰腺癌转移的生物药品等具有重要的理论和应用价值。

本课题从三个方面入手，深入探究胰腺癌的发病机制，探寻胰腺癌治疗的理想策略：.1）我们通过半定量分析HIF-1α、DEC-2、MET及RON蛋白的表达量，发现HIF-1α与DEC-2的表达存在正相关性，而在约30%的胰腺癌患者的癌组织中发现RON异常高表达，并且RON高表达的患者平均生存期出现显著性下降。在缺氧条件下HIF-1α可直接作用于DEC-2并介导下调RON的表达，促进肿瘤、细胞增殖。此外，通过分析胰腺癌患者临床标本，发现胰腺癌患者体内Rab2B与miR-488表达水平呈负相关性，miR-488可通过抑制Akt/mTOR/S6K1通路，激活caspase-3，caspase-9从而上调PARP的表达促进胰腺癌细胞生长。并且，我们成功构建了两种吉西他滨耐药的胰腺癌细胞系，通过RNA-seq分析细胞mRNA谱，鉴定出与胰腺癌细胞耐药最为相关的3种mRNA： RRM1、STIM1和TRIM21，并且证明它们与胰腺癌细胞的高侵袭性密切相关。另外，我们发现EZH2抑制剂GSK343可以抑制胰腺癌细胞的增殖，诱导细胞凋亡，并通过抑制AKT/mTOR途径介导细胞自噬。.2）研发结构稳定的新型RON靶向作用的抗体药物耦联物Zt/g4-MMAE，其具有诱导RON内吞的能力，影响肿瘤细胞的细胞周期进程，促进细胞凋亡，与5-氟尿嘧啶联合使用可有效增强对肿瘤细胞的杀伤作用。成功制备7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）的自组装无载体纳米药物。证明胰腺癌细胞对该药物具有较CPT-11更高的敏感性。借助小鼠模型进行毒理学分析和药效评估，进一步证明该药物具有显著有效的肿瘤治疗效果，证明这些药物具有良好的药代分布和治疗安全性，具有良好的应用转化前景。.3）我们利用低温等离子体技术处理胰腺癌细胞，发现其有助于胰腺癌细胞内脂滴降解，调节胰腺癌细胞内脂质代谢相关基因RASD2的表达水平后发现RASD2高表达能够减少低温等离子体导致的肿瘤细胞死亡，并且降低胞内ROS以及脂质过氧化水平。提示了RASD2促进肿瘤生长，而低温等离子体或可有效的抑制肿瘤生长。.本项目执行期间共发表40篇SCI论文，并在2018年第三届国际肝胆胰外科杭州峰会暨第一届国际肝胰移植西湖大会和第三届加速康复外科西湖大会、2019第一届浙港外科会议等进行推广，并受到热烈反响。