miR-195、miR-497对猪骨骼肌成肌信号通路（IGF-1/PI3K/AKT）的调节作用研究

猪miR-195、miR-497是申请人实验室分离到的在骨骼肌生长发育、成肌细胞分化过程中显著上调表达的两个同源microRNA（miRNA）。目前它们所调节的靶基因以及在骨骼肌生长发育中的作用机制都还不清楚。通过对猪miRNA与mRNA表达谱数据联合分析以及靶基因软件预测，我们发现miR-195、miR-497可通过作用于骨骼肌成肌信号通路（IGF-1/PI3K/AKT）中的2个关键基因，调控该信号通路，并且我们在细胞中的试验也初步证明了miR-195可下调AKT3蛋白翻译。本项目拟对猪miR-195、miR-497的转录调控机制、靶基因以及对IGF-1/PI3K/AKT信号通路的调控作用进行深入研究，阐明猪miR-195、miR-497在骨骼肌细胞生长、分化过程中的调控机理，研究结果可为揭示猪骨骼肌生长发育调控的分子机制提供重要理论数据，也为猪生长性状改良提供新的候选基因或分子标记。

猪miR-195、miR-497是申请人实验室分离到的与猪骨骼肌生长发育相关的两个同源microRNA（miRNA）。本项目主要对这两个miRNAs的转录调控及其在骨骼肌细胞中的生物学功能进行了研究。结果表明，miR-195/497在猪基因组中紧密连锁，在骨骼发育过程中显著上调表达。利用双荧光素酶、EMSA以及CHIP对这两个miRNAs的转录调控进行研究，结果表明这两个miRNAs具有同一个转录调控区，前体由同一个转录本转录，它们都受NF-kappa B转录因子负调控。在骨骼肌细胞中进行功能研究表明，过表达这两个miRNAs能抑制肌细胞增殖，抑制这两个miRNAs可促进成肌分化。利用荧光素酶及Western blotting对这两个miRNAs的靶基因进行研究，结果表明miR-195/497抑制细胞周期蛋白CCND2和CCNE1基因。本研究初步揭示了miR-195/497的转录调控机制及其在骨骼肌细胞中的生物学功能，研究结果为揭示猪骨骼肌生长发育调控的分子机制提供重要理论数据。研究内容均按计划进行，研究达到了预期目标，目前已发表标注基金资助的SCI论文2篇，已投稿中文期刊3篇；正在整理的英文论文1篇。申请国家发明专利一项。