慢性乙型肝炎证候动态网络标志物及其分子机制的研究

Chronic hepatitis B is a major global health problem. Traditional Chinese medicine (TCM) treatment was widely used for chronic HBV disease with great advantages and effectiveness. TCM treatment is based on ZHENG (also known as TCM syndrome), which evolves with the progress of the disease. ZHENG differentiation and its dynamic mechanism of evolution is the bottleneck of promoting clinical effect of TCM. BY using the methods of transcriptomics and Dynamic Network Biomarker (DNBs) of system biology, we will explore the material basis of “dampness-heat accumulation ZHENG (Dampness) - liver kidney Yin deficiency ZHENG (Deficiency) - static blood blocking collaterals ZHENG (Stagnate)”. Furthermore, we will explore the molecular and dynamic mechanism of DNBs of TCM ZHENGs in chronic HBV patients. The study might be valuable to understand the etiology, pathogenesis and the disease-ZHENG relationship of chronic HBV disease.

慢性乙型病毒性肝炎（慢乙肝）是一个严重的全球卫生问题，中医药辨证治疗慢乙肝具有特色和优势。证候是中医辨证施治的核心，且随着疾病的进展而发生变化。证候的客观辨识及其动态演变机制的阐释是提高中医药临床疗效需要突破的瓶颈。本课题拟应用转录组学和系统生物学的动态网络标志物（Dynamic Network Biomarkers，DNBs）的研究方法，探讨慢乙肝“肝胆湿热证（湿）－肝肾阴虚证（虚）－瘀血阻络证（瘀）”动态演变的分子生物学物质基础，阐释慢乙肝证候的生物标志物及其动态演变机制。研究对更好地理解慢乙肝的病因病机及病证关系，具有重要的科学意义。

慢性乙型病毒性肝炎（Chronic hepatitis B，以下简称慢乙肝）是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)引起的肝脏慢性炎症坏死性疾病。中医辨证治疗慢乙肝具有特色和优势。证候是中医辨证施治的核心。但是“证候”缺乏客观指征，临床把握中很大程度的依赖于医生的诊疗经验。证候并非一成不变，可以随着疾病的进展而发生动态变化。证候动态生物标志物及其动态演变机制是中医证候理论研究与诊断的关键问题之一。本研究提出“慢乙肝证候具有其动态变化规律及其动态网络标志物”的研究假说。.首先我们以正常对照人群、慢乙肝肝胆湿热证、肝郁脾虚证和肝肾阴虚证慢乙肝患者为研究对象，进行基因芯片表达谱分析。从基因芯片表达谱数据初步分析显示，各个典型证候的差异基因具有不同的功能富集，体现了证候在分子功能层次的差异。进一步，我们计算证候动态网络标志物DNBs(Dynamic Network Biomarker)，找到了51个DNB基因的同时，发现证候发生突变的阶段为肝郁脾虚证阶段。对DNB的功能分析显示，功能主要集中在分子伴侣介导的蛋白质折叠，T细胞活化的正调控，脂肪沉积等方面。我们将DNBs 映射至全基因调控网络，构建慢乙肝证候动态演变基因网络并探讨慢乙肝证候动态生物分子网络的功能变化特征。在DNB调控网络在突变点前后的重新排布分析中，DNB和反转基因的功能主要集中在代谢和细胞因子相关通路，这与以往文献报道也一致，证候动态变化多与机体能量代谢，细胞因子等紧密相关。进一步，我们收集慢乙肝患者外周血，采用蛋白组学的方法，对候选DNBs 和受其调控的细胞因子进行分子生物学实验验证。CCL3, IL17, IL15, CCL27, LIF, CLEC11A, and CSF2等细胞因子在不同证候间具有显著的表达差异。对DNB成员中的PLG和F12的蛋白组学验证发现它们在证候之间也有显著差异。.我们的研究从动态网络的角度阐释了慢乙肝证候动态变化的机制，对更好的理解慢乙肝的病因病机及病证关系，阐释慢乙肝证候潜在的生物标志物及其动态变化机制具有重要的科学意义。