黄芪、水蛭对大鼠肾系膜细胞影响的组分配伍研究

研究将激光扫描共聚焦显微镜技术与分子生物学相结合，观察黄芪不同组分（益气代表药物）、水蛭不同组分（化瘀代表药物）及其配方（正交设计）对GMC核转录因子-κB及其抑制蛋白、基质金属蛋白酶2、PDGF-BB活性的影响；以及对肾小球系膜区bcl-2的表达，及调控凋亡基因Fas/FasL的影响。明确黄芪、水蛭治疗小儿肾病的有效组分（成分）和最佳配伍。比较益气和化瘀药物对肾系膜细胞的不同影响，以病理改变和分子生物学指标为依据，探讨增生性肾小球肾炎发生发展过程中气虚和血瘀的"标""本"演变，为临床辨证用药提供依据。同时建立激光扫描共聚焦显微镜检测大鼠肾系膜细胞NＦ-κB表达、PDGF-BB、金属蛋白酶2活性和表达实验方法，为研究中药复方药理开辟一个新的途径。

本课题基本按照标书的设计，完成了黄芪水蛭单体（黄芪多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、水蛭素）的提取，黄芪水蛭含药血清的制备，细胞的培养，采用激光共聚焦、RealTime-PCR、Westernblotting、免疫荧光等实验方法，完成了益气化瘀药中药及其配方对系膜细胞影响的对比研究。结果：黄芪水蛭组分及其配方可通过抑制NF-kb、Ikb途径的激活，阻止炎症反应的发生，延缓肾小球疾病的进展；可通过干预Bcl-2的过度表达引起的抑制细胞凋亡，并可通过抑制Fas、Fasl基因来调控细胞的增殖与凋亡；可通过平衡MMPS/TIMPS系统，维持细胞外基质的生成与降解的协调，减少基质的沉积，延缓肾小球硬化的进展；可抑制PDGF-BB的过度表达，抑制系膜细胞增殖和细胞外基质沉积；益气化瘀药物黄芪、水蛭不同组分及其配方在分子及蛋白水平均有一定的作用。通过本课题的研究，表明黄芪水蛭能够不同程度的抑制系膜细胞的增殖及细胞外基质的沉积，改善或延缓肾小球硬化的程度，体现了中药的作用的多靶点效应。从分子及蛋白水平研究中药的作用机制，为临床中药的研究提供了新的思路和方法。