Toll样受体7活化导致MIF高表达和EBV再次激活的研究

Chronic inflammation infiltration and virus infection are two of the most important factors in tumor genesis, in which, MIF and EBV are very famous members of pro-inflammatory cytokines and oncogenic virus. In our preliminary study of clinical IOIP detection, we found most of the patients’ tissue and plasma were EBV-DNA positive, as well as high percentage of positive EBV recent-infection-related antibodies. On the other hand, Microarray data showed that TLR7 signal pathway was activated in IOIP patients. Furthermore, the results of preliminary study in cell lines implied that there might be a missing link between TLR7 activation and MIF over-expression and EBV reactivation. Therefore, our topic is aimed at the discovery of the relationship among TLR7 activation, MIF expression and the changes of EBV life cycle, by means of TLR7agonist inducement in different types of cell lines. Expression of MIF and its receptors, EBV related antigens/antibodies, as well as MIF downstream pathways in both gene and protein levels will be detected. In addition, the influence of long-term activation of TLR7 in tumor genesis and EBV reactivation will also be investigated. Our results may help reveal the mechanism of TLR7 induced chronic inflammation and tumor genesis, besides, recommendations for the strategy of TLR7 agonist in clinical trials would be raised.

慢性炎症与病毒感染是肿瘤发生机制的重要因素，其中MIF和EBV又分别是前炎症因子和致癌病毒中的重要成员。本课题组前期根据IOIP临床验品的检测发现大部分患者血浆、组织中EBV-DNA阳性，EBV近期感染相关抗体阳性率较高，Microarray显示TLR7在IOIP中激活。细胞预实验结果暗示TLR7激活与MIF过表达和EBV再次激活存在潜在联系。因此本课题旨在通过激活TLR7通路，探究MIF表达量与EBV生活周期的变化，并进一步揭示TLR7激活可能导致的肿瘤生成机制。拟采用TLR7激动剂，激活不同种类细胞的TLR7通路，检测细胞激活前、后MIF及其受体、下游通路指标的表达量和EBV生活周期的改变，并探索TLR7长期激活对肿瘤生成的影响。相关结果对于揭示TLR7激活可能引发的慢性炎症、EBV再次激活、肿瘤生成机理，以及对于TLR7激动剂应用范围的评价具有重要临床应用价值。

TLR7 和 TLR8 具有较高的同源性，二者均位于内涵体表面，配体均包含dsRNA 类病毒。TLR7/8激动剂广泛应用于抗病毒治疗、疫苗免疫佐剂和抗肿瘤治疗中。TLR7/8激活是一把双刃剑，所产生的免疫风暴可能对机体造成损伤。另一方面， EBV病毒在正常人群中的高感染率、高潜伏率和高致病率一直以来是临床上的治疗难点之一。本项目根据前期研究提示，旨在探讨TLR7/8活化对巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）的表达量的影响，以及与EBV再次激活的关系，并为炎症-肿瘤转化机理和TLR7/8激动剂应用范围提供线索。.主要得到以下发现：.1. TLR7/8激动剂R848能够促进MIF的表达与释放：细胞、动物学水平及临床样本检测显示，TLR7/8激活可显著增加各类细胞和组织中MIF的释放，并在基因蛋白水平上调MIF的表达。遗传学研究显示，这可能与MIF基因多态性有关。大量释放的MIF可进一步促进肿瘤生成与病灶纤维化，加速疾病进展。此外，TLR7/8活化后，仅引起EBV+的B细胞中MIF表达上调，说明EBV潜伏感染与MIF的表达具有一定相关性。.2. TLR7/8受体激活仅在转录组水平激活B淋巴细胞潜伏感染的EBV，但不产生完整病毒颗粒：潜伏期EBV的存在对于R848诱导的TLR7/8的激活产生限制作用，其作用机制可能为诱导EBV立早期启动子BRLF1的甲基化水平变化导致EBV转录组水平的再次激活，并通过与宿主细胞转录水平相互作用，抑制EBV的DNA复制与蛋白表达，造成免疫逃逸。.3. TLR7/8受体持续活化可能促进EBV潜伏感染的B细胞肿瘤生成：TLR7/8活化对EBV潜伏感染B淋巴瘤细胞凋亡、周期、增殖并无显著影响，但促进克隆形成。相关机制可能与持续激活的PI3K-AKT、MAPK-p38、ERK1/2、JNK通路，以及NF-κB的核转位有关。.本研究发现的TLR7/8活化导致的以MIF为主的系统性炎症反应以及EBV转录水平激活，有助于临床上更好的评价该类免疫佐剂药物的应用范围（如疫苗研发、抗肿瘤治疗等）。另一方面，相关结果对于揭示EBV逃逸宿主天然免疫的机制和EBV相关肿瘤的治疗药物开发具有重要理论研究意义和应用价值。