基于蛋白质组学策略的新肌炎特异性自身抗体的鉴定与功能初步探讨

Myositis specific autoantibodies have been extensively demonstrated to be important biomarkers for myositis, aiding in diagnosis, helping to classify patients into more homogeneous groups, predicting additional clinical complications and response to treatment. Untill now seventeen kinds of myositis specific autoantibodies have been identified in about 50% -60% of patients with myositis, which means that a number of novel myositis autoantibodies need to be investigated. Our study had found that 15 patients with myositis were screened as negative for all known myositis specific autoantibodies using autoantigen microarray. The present study will continue to screen for autoantibodies profile in chinese cohort with myositis using autoantigen microarray combined with non-radiolabelled immunoprecipitation . For the serums with negative autoantibodies, the protein microarray or muscle lysate or lung lysate will be used to identify novel myositis autoantibodies. The novel myositis autoantigens will be confirmed by immunoaffinity purification and mass spec. The prevalence and associated clinical features of novel myositis autoantigens will be investigated in patients with myositis. The aim of the present study is to find more biomarkers including the differentially expressed genes, serum cytokines and novel myositis autoantigens for aiding in diagnosis, subsets, predicting response to treatment and prognosis for myositis.

肌炎特异性自身抗体(MSAs)对于肌炎的诊断、分型、疗效评估和预后判断均有重要的指导意义。虽然十七种MSAs已被鉴定，但是这些抗体的总阳性率仅为50-60%，因此仍然有自身抗体尚未被发现。本课题组通过高通量的自身抗原芯片的筛查，发现15例肌炎患者的MSAs检测均为阴性。本课题拟采用自身抗原芯片结合非放射免疫沉淀法继续筛查肌炎患者人群的自身抗体谱，进一步筛选抗体阴性的血清样本。进一步采用含9000个蛋白质的芯片、骨骼肌或肺裂解液，在自身抗原芯片筛查为抗体阴性的肌炎患者血清中寻找新自身抗体，通过免疫层析纯化和质谱分析鉴定新自身抗原，并研究其在肌炎患者人群中的阳性率和相关的临床表现。开展本项目，可望促进肌炎的精准诊治和预后判断，并发现新的肌炎特异性自身抗体，为肌炎的诊断和疾病分型提供新的思路。

肌炎特异性自身抗体(MSAs)对于肌炎的诊断、分型、疗效评估和预后判断均有重要的指导意义。本项目采用含128个自身抗原芯片对138 例肌炎患者、70 例SLE患者、50例 SSc患者 和 100 例健康对照的自身抗体谱进行分析，在肌炎中阳性率最高的仍是JO-1（24.6%）和MDA5（23.2%）。82.4%的患者血清中至少存在一种MSAs，且MSAs的共存现象，即存在两种或两种以上的MSAs，出现在41.7%的肌炎患者中。分析各种自身免疫性疾病自身抗原谱的特征，建立自身免疫性疾病的诊断模型，并发现联合检测多种自身抗体具有更高的诊断和预测价值。建立检测MDA5、NXP2、 HMGCR 、SAE1、EJ等肌炎特异性自身抗体的非放射免疫沉淀法，证实自身抗原芯片筛选的阳性患者。进一步用Illumina HT-12 v4表达谱芯片对抗MDA5阳性、抗Jo-1阳性的肌炎患者及正常对照者的外周血单个核细胞进行基因表达谱分析，发现抗Jo-1抗体阳性和抗MDA5抗体阳性患者PBMC的基因表达谱存在明显差异；我们对抗Jo-1抗体阳性和抗MDA5抗体阳性患者特异性的DEGs分别进行生物学功能以及信号通路分析，发现抗MDA5抗体阳性患者中表达上调的基因富集于RIG-Ⅰ样受体、Toll样受体、I型干扰素等病毒感染应答通路；表达下调的基因属于抗原加工提呈（HLA-A）、自然杀伤细胞介导的细胞毒作用、TGF-β受体信号通路调节等通路。RT-PCR证实RIG-I样受体通路中的IFIH1、ISG15和DDX58以及趋化因子CCL2、CCL8在抗MDA5抗体阳性肌炎患者的PBMC呈高表达。采用含9000个蛋白质的芯片在自身抗原芯片筛查为抗体阴性的肌炎患者血清中寻找新自身抗体，筛选出32个肌炎中高表达的蛋白，用免疫印迹和ELISA法验证其中3个蛋白质，但是没有发现新的肌炎特异性抗体。以上研究为肌炎的诊断和疾病分型提供新的思路，并为抗MDA5、抗JO-1阳性肌炎的发病机制研究提供了新的靶标。