慢性高原病患者骨髓细胞HIF-1、HIF-2、EPO/EPOR及VEGF/VEGFRs表达水平和骨髓组织微血管密度检测研究

慢性高原病（CMS）以红细胞过度增生和低氧血症为特征，发病机制尚未阐明。HIF-1和HIF-2调节EPO及VEGF基因表达，而EPO和VEGF均可以自分泌方式刺激红系造血，也均具有促进内皮细胞增殖等活性。骨髓微血管及内皮细胞与红系造血存在密切关系。本项目拟以CMS患者为研究对象，检测骨髓单个核细胞（MNC）HIF-1α、HIF-2α、EPO及EPOR、VEGF及VEGFRs（Flt1和Flk1）mRNA和蛋白质水平，检测骨髓组织EPO及EPOR、VEGF及VEGFRs蛋白质水平和微血管密度（MVD），测定血液EPO和VEGF水平等。了解上述指标的变化及相互关系，试图证实CMS患者中，在HIF-1和/或HIF-2调节下，EPO和VEGF通过自分泌方式刺激造血；证实骨髓MVD增高，并与EPO/EPOR、VEGF/VEGFRs及红细胞增多有关。为阐明CMS发病机制积累资料。

课题以34例慢性高原病（CMS）患者为研究对象。流式细胞测定CMS患者骨髓MNC HIF-2、EPO及VEGFR2 表达分别为[M(IQR)][3.870%(1.920-6.320)、22.650%(13.380-36.720)、20.670% (8.060-67.610)]均高于对照组（30例）中的 [1.860(3.810-0.840)、5.790% (3.130-10.295)、8.130 %(2.210-14.850)]（ P < 0.05）；荧光定量PCR测定CMS骨髓MNC HIF-2、EPO及VEGFR2mRNA为[M(IQR)][1.4951（0.985-1.653）、3.120（1.716-4.450）、1.666（1.023-5.050）]高于对照[1.0490（0.856-1.398）、0.836（0.472-1.416）、0.955（0.387-2.704）]（ P < 0.05）；CMS骨髓MNC HIF-2蛋白及mRNA均与Hb成正比（Rho =0.398，Rho =0.358，均P < 0.05）；免疫组化测定CMS患者骨髓组织HIF-1、HIF-2、EPO、VEGF及VEGFR-2表达高于对照组（均P < 0.05）,其中HIF-2α、EPO、VEGF均与Hb成正比（Rho = 0.582，Rho = 0.484，Rho = 0.534，均P< 0.05），CMS骨髓MVD（14.536±8.839）高于对照组（8.451±2.976）（P < 0.05），MVD与Hb呈正相关（Rho=0.413，P=0.05）；ELASA法测定CMS骨髓上清液EPO浓度[M(IQR)][1428.744pg/ml(940.266-1629.003)]高于对照[905.433pg/ml (688.493-1287.546)]（P< 0.05），骨髓上清液log EPO浓度与log Hb浓度呈正相关（r = 0.390，P< 0.05）；CMS血清和骨髓上清液VEGF浓度均高于对照（P< 0.05），但均与Hb无相关性。说明在CMS患者骨髓中，缺氧导致骨髓细胞HIF-1和HIF-2增加，促进下游EPO和VEGF的表达增加，两者均可通过自分泌/旁分泌途径刺激造血并促进骨髓MVD增高，增高的MVD为幼稚红细胞的生长提供环境条件，从而导致CMS的发生及发展。