VEGF/eNOS/NO/MMP-9信号通路在冠心病痰浊壅塞证内皮祖细胞动员及瓜蒌干预中的作用机制

不同证候冠心病(CHD)发病机制是中医基础理论领域亟待解决的科学问题，也是心血管领域关注的焦点。我们据大量证据推测CHD痰浊壅塞证的关键致病因素是：血脂代谢紊乱使血管内皮细胞(VEC)内的VEGF/eNOS/MMP-9信号通路不能正常激活，动员内皮祖细胞(EPC)能力低下,血管修复能力降低。拟以患者和模型大鼠血清、低氧、营养胁迫、ox-LDL处理的人冠状动脉内皮细胞株为细胞模型，培养液中添加瓜蒌成分培养细胞，结合利用大鼠模型进行体内实验，采用RT-PCR、原位杂交、Western bolt、免疫荧光等，检测大鼠冠状动脉内皮层和培养细胞内VEGF、eNOS、MMP-9基因mRNA、蛋白表达水平及蛋白激活状态，深入研究该信号通路在CHD痰浊证发病及瓜蒌干预中的机制。试图寻找出该病证发病关键环节及中药干预靶点，为深入了解该病证发病机制及有效药物干预提供科学依据；为心主血脉理论增添细胞信号转导新

冠心病痰浊壅塞证(CHD-TZYS)发病及祛痰散结法干预的微观机制是中医基础理论领域亟待解决的科学问题。本项目的科学假说是：血脂代谢紊乱导致体内的VEGF/eNOS/NO/MMP-9信号通路不能正常激活，动员骨髓内皮祖细胞(EPCs)的能力低下,血管损伤修复能力降低。为验证假说，我们利用CHD-TZYS患者、动物及细胞模型，体内、体外实验相结合，系统研究上述信号通路在CHD-TZYS EPC动员及瓜蒌干预中的作用机制。.首先以低氧、营养胁迫联合处理大鼠骨髓EPCs，造成CHD-TZYS细胞损伤模型，培养液中添加瓜蒌组分或注射液培养细胞，检测并比较各组细胞生长状态、生存率。结果表明，瓜蒌皮可显著提高细胞存活率、培养液上清中VEGF的含量，该中药可能通过促进VEGF的表达提高缺血缺氧条件下EPCs的生存能力。 .我们利用连续高脂饮食灌胃法，升高大鼠血脂，结合冠状动脉结扎法制造CHD-TZYS大鼠模型。不同时间点分批连续处死动物，取外周血并检测其中EPCs含量、血浆中VEGF、eNOS、NO及MMP-9含量或活性，绘制急性心肌缺血(AMI)后7天内血液中CEPCs、上述4种信号分子含量的动态变化曲线。比较各组大鼠签署指标的水平及变化趋势。数据表明：AMI7天内, CHD-TZYS模型组大鼠CEPCs含量维持在较低水平，不能稳定上升，波动幅度大。瓜蒌皮干预组大鼠CEPC含量1～7天中一直稳定上升并显著高于模型组。模型组大鼠eNOS、NO水平无显著性变化，VEGF、MMP-9上升幅度小，且一直处于较低水平。瓜蒌皮干预组4种分子上升幅度平稳，其水平高于模型组。.本项目临床研究表明：CHD-TZYS患者外周血干、祖细胞含量极低，检测阳性率低，无统计意义。患者遗传背景差异大，血脂、血液粘稠度较高，服用多种药物；多种因素影响检测，数据重现性很差。.本研究首次连续检测了在AMI后第1～7天内,正常对照组、单纯AMI组、高脂血症对照组、高血脂合并AMI组以及瓜蒌皮干预组5组大鼠外周血EPCs含量以及4中信号分子的水平，绘制了客观细致的动态变化曲线。揭示了VEGF/eNOS/NO/MMP-9通路激活及EPCs动员障碍是CHD-TZYS发病及祛痰散结中药干预的关键环节，在细胞信号转导层次揭示了CHD痰浊壅塞病因病机及中药祛痰宽胸理论的现代科学内涵。