调控前脂肪细胞分化对腹透患者血管内皮细胞功能的影响及机制研究

Endothelial dysfunction is responsible for deteriorated peritoneal morphology and function and cardiovascular events in peritoneal dialysis patients. The mechanisms of endothelial dysfunction in peritoneal dialysis remain unclear. Recent studies showed that obese patients with adipocyte differentiation contribute to endothelial dysfunction. And cytokines increased in adipocyte differentiation play a role in peritoneal endothelial cell in our previous study. Also, peritoneal dialysis patients presence of increasing visceral fat, however，no data about adipocyte differentiation on peritoneal morphology and function as well as cardiovascular events of peritoneal dialysis patients. In present study, we observed the role of dialysate in the expression of cytokines of adipocyte and their effects on endothelial dysfunction in conditions of adipocyte differentiation in vitro. Then, we mimic the process of peritoneal dialysis on aP2-Pref-1/hFc transgenic mice and wild type mice to evaluate the mass of visceral fat, morphology and function of peritoneum, function of vessel and endothelium as well as cytokines expression of fat mass to explore the role of the adipocyte differentiation on endothelial dysfunction. The purpose of this study is the investigation of new aspects on protection of peritoneal morphology and function and prevention of the cardiovascular events to maintain long term and the viability of peritoneal dialysis.

血管内皮细胞功能紊乱是腹透患者腹膜结构和功能改变及心血管疾病发生的重要原因，目前腹透患者血管内皮细胞功能紊乱的机制还不清楚。非肾病肥胖患者中发现脂肪细胞增加后和血管内皮细胞功能紊乱有关。我们的前期研究中关注的影响腹膜血管内皮细胞功能的细胞因子，在脂肪细胞中也有表达。腹透患者表现为内脏脂肪细胞增多，然而脂肪细胞数量增加后对腹透患者血管内皮细胞功能的影响及机制未见报道。本研究通过体内外实验模拟腹透过程，同时通过调控前脂肪细胞分化影响脂肪细胞数量，来观察前脂肪细胞分化前后，在非生物相容性腹透液作用下，脂肪细胞中相关细胞因子的表达量变化及对血管内皮细胞功能的影响。通过本研究为探索保护腹透患者腹膜结构和功能及预防心血管疾病发生寻找新的思路，达到维持腹透长期性和有效性的目的。

长期腹膜透析（腹透）患者有发生腹膜超滤衰竭导致患者退出腹透和发生心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)导致患者死亡的风险。内皮细胞与腹膜血管新生从而导致腹膜超滤衰竭及CVD的发生密切相关。同时，研究显示腹透患者可出现内脏脂肪含量的增加，内脏脂肪可以分泌多种细胞因子。然而腹透患者内脏脂肪增加和腹膜血管新生及CVD发生之间的关系目前仍不清楚。本研究探讨在腹膜透析中脂肪细胞对血管新生及内皮细胞功能紊乱的影响。研究分为二部分，在体外实验中诱导小鼠前脂肪细胞3T3-L1分化成为脂肪细胞，脂肪细胞在高糖的干预下观察脂肪细胞中廋素、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α ，TNF-α）表达及加入廋素或VEGF中和抗体对内皮细胞增殖、管状结构形成能力和迁移能力的改变。并观察不同条件培养基下内皮细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的表达量变化，并利用p38丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）抑制剂SB203580检测p38 MAPK信号通路在ICAM-1和ET-1表达中的作用。在体内实验中构建前脂肪因子-1（Preadipocyte factor-1，Pref-1）过表达腺相关病毒（adeno associated virus，AAV）载体，注射至C57BL/6小鼠腹腔制作脂肪生成减少模型及给小鼠腹腔内注射腹透液模拟腹透治疗后记录并观察小鼠体重及内脏脂肪量的改变、检测腹膜血管数量和通透性及血清VEGF和ICAM-1表达量变化。通过本研究我们发现非生理性腹透液的高糖成分，可以通过脂肪细胞分泌的细胞因子影响内皮细胞的功能，与腹透患者腹膜血管新生和腹透患者CVD的发生有关，减少内脏脂肪生成可以作为维持腹膜结构和功能的完整性以及预防CVD发生，从而维持腹透长期性和有效性的手段。