细胞因子及受体的新截短型剪接体的预测及功能研究

细胞因子及其受体构成的信号传导通路在细胞间通讯中起着重要作用，受到精密调控。其中一种调控机制是通过可变剪接产生截短型剪接体，其蛋白产物通过竞争底物对全长剪接体蛋白起调控作用。比如细胞因子受体的截短型剪接体，其产物丢失跨膜区，成为可溶形式，与全长膜受体竞争配基而影响下游信号传导。目前已发现多种细胞因子及受体存在截短型剪接形式，并已用于药物开发和临床诊断研究。本课题的目标是发现新的细胞因子及受体的截短型剪接体。研究思路为：通过对EST数据的遴选，获得带有polyA信号并且位于已知基因内部的EST，作为截短型剪接体的候选集合。而后从中挑选已知细胞因子及受体，或与疾病相关的预测分泌蛋白/膜蛋白的新剪接体，进行克隆验证；并与全长剪接体进行对照功能研究；在临床标本中进行检测，探索与疾病的相关性。目前预测工作已经完成，并克隆得到了TNFR1和IL19等四个截短型剪接体，证明了课题的可行性。

项目实施过程中建立了一套完整的从EST预测截短型新剪接体的流程，遴选了几十个细胞因子/膜蛋白相关基因的新剪接体。成功获得新剪接体的细胞因子基因有CXCL13、CCL2、CXCL3、IL8、IL1B、IL10、IL19、IL16、EGF、VEGFA、ANGPT1、FGF9、FLT3LG、TNFa、TNFSF8、TNFSF15、TNFSF10等。重点挑选了TNFSF10 (TRAIL)，IL10，TNFSF8，TNFSF15的新剪接体在细胞系水平进行功能研究，考察对细胞增殖、凋亡的影响，利用报告基因考察剪接体对细胞内重要信号通路如NFκB，STAT通路的影响。发现TNFSF10的多个剪接体没有如预期设想对细胞凋亡发挥调节作用，但却对NFκB通路有较强的激活作用，可能参与炎症反应。表达谱数据表明TRAIL剪接体在淋巴细胞如T细胞、单核细胞内高表达，提示可能参与免疫细胞间的信号调控。