巴贝斯虫裂殖子“马达复合物”组件蛋白结构解析和功能研究

"马达复合物"是2006年Baum等人通过对弓形虫和疟原虫的研究提出的，由驱动顶复门寄生虫滑行运动和入侵宿主细胞的关键性分子组成的一个保守的蛋白复合物。现已阐明的分子组成为TRAP-aldolase-actin-MyoA-MLC/MTIP-GAP45-GAP50。对巴贝斯虫裂殖子"马达复合物"的研究，至今只有对为数不多的几个组件蛋白基因如TRAP、actin和MyoA的分离和鉴定。本研究将以我国北方地区广泛分布的莫氏巴贝斯虫为研究对象，对其裂殖子"马达复合物"组件蛋白基因进行克隆和表达；通过免疫组化、免疫沉淀、2D电泳、质谱分析等方法对其"马达复合物"的组件蛋白进行定位和确切结构组件进行解析；采用RNA干扰技术、体外血清和特异性药物的抑制试验初步阐明其在巴贝斯虫裂殖子移动和宿主细胞入侵中的作用机制。为解析其结构、探索移动与宿主细胞入侵机理、搜寻抗巴贝斯虫新型疫苗抗原和药物靶位点做出铺垫。

“马达复合物”（滑动体）是驱动顶复门寄生虫滑行运动和入侵宿主细胞的关键性分子组成的一个保守的蛋白复合物。本研究以我国广泛分布的莫氏巴贝斯虫为研究对象，通过完成莫氏巴贝斯虫裂殖子“马达复合物”7个组件蛋白基因全长序列的克隆、表达、纯化、抗体制备、天然组件蛋白的识别鉴定、抗体对裂殖子入侵红细胞的抑制实验等研究工作，初步确定巴贝斯虫裂殖子滑动体的组成结构是由顶复门寄生虫通用的7个组件蛋白——gap45、gap50、 myosin A、 mlc、 actin、 aldolase和 trap构成，而且为开展巴贝斯虫裂殖子运动和入侵宿主细胞中的作用的研究探明了道路；另外，还完成了莫氏巴贝斯虫天祝株、羊巴贝斯虫未定种新疆株和牛巴贝斯虫体外培养系统的建立，并筛选出3个单克隆虫株；同时，为了应用遗传操作技术开展巴贝斯虫滑动体各组件蛋白功能的研究，完成了莫氏巴贝斯虫转染条件的筛选，并确定杀瘟素（blasticidin）为构建转染载体时的抗生素筛选标记；最后，为了后期应用遗传操作技术顺利开展巴贝斯虫基因功能的研究，完成了两种羊的巴贝斯虫（莫氏巴贝斯虫临潭株和羊巴贝斯虫未定种新疆株）的全基因组序列测定、注释和分析工作，为了后期开展巴贝斯虫基因功能的研究奠定了基础。综上所述，该项目已按照项目书计划完成了申请书和任务书中的研究内容，同时为后期研究工作的开展奠定了基础。