新型肝纤维化保护剂的发现、作用机制和靶点以及构效关系研究

Modern medical research shows that liver fibrosis is a common result of the development of various chronic liver disease, but also the necessary stage of cirrhosis, liver cancer is a precursor. Clinical anti-liver fibrosis drug efficacy is not ideal, expensive drugs, adverse reactions and other obstacles to the treatment of liver fibrosis. (T-HSC / Cl-6) increased the proliferation of rat hepatic stellate cells (α-SMA), and the results showed that the total saponin hydrolyzate 25-OCH3-PPD could significantly inhibit the proliferation of rat hepatic stellate cells (t-HSC / TGF-β, TIMP-1 expression, regulation of NF-κB redistribution, and can significantly reverse the CCl4-induced rat liver fibrosis. The aim of this study is to study the anti-hepatic fibrosis mechanism and target of this kind of aglycone (mainly to study the effect of p38 MAPK on TGF-β / Smad pathway to play an anti-hepatic fibrosis effect and accurate target). At the same time, with the guidance of key pharmacophores and active sites, the compounds with better activity were modified and optimized. The activity of the compounds was investigated by means of activity test and reverse alignment with biological macromolecules. Relationship, presumption of its mechanism and target, and then to find the ideal liver fibrosis protective agent lead compounds.

现代医学研究表明肝纤维化既是各种慢性肝病发展的共同结果，又是肝硬化的必经阶段，更是肝细胞癌的前兆。临床抗肝纤维化药物的疗效并不理想，药物昂贵，不良反应大等阻碍了肝纤维化的治疗。申请人在前期研究工作中发现三七总皂苷水解产物25-OCH3-PPD可显著抑制大鼠肝星状细胞（t-HSC/Cl-6）增值，减少平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TGF-β、TIMP-1的表达，调节NF-κB重分布，同时可显著逆转CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度。本项目拟对该类苷元的抗肝纤维化作用机制和靶点进行研究（主要研究否是通过经p38 MAPK调节TGF-β/Smad通路发挥抗肝纤维化作用，精确的作用靶点）。同时，以关键药效团以及活性位点为指导，有针对性的对活性较好的化合物进行结构修饰和优化，通过活性测试和与生物大分子反相对接等方法探讨该类化合物的构效关系，推测其作用机理和靶点，进而发现理想的肝纤维化保护剂先导化合物。

肝纤维化是各种慢性肝病发展的共同结果，是肝硬化的必经阶段，是肝癌的前兆。临床抗肝纤维化药物的疗效并不理想，药物昂贵，不良反应大等弱点阻碍了肝纤维化的治疗。本课题拟对新达玛烷型人参皂苷25-OCH3-PPD及其结构修饰物的抗肝纤维化作用及其机制进行研究。本课题完成了多种诱导肝纤维化模型的建立和评价，确定了造模周期，同时，对化合物25-OCH3-PPD的药效进一步确定。同时，本课题阐明了25-OCH3-PPD 对各种肝纤维化模型的逆转作用，检测给药后模型大鼠肝脏和血液内生化指标的变化、肝/体比值以及HE 和Masson染色等生化指标。研究结果表明化合物25-OCH3-PPD对肝星状细胞(HSC)和HepG2细胞中p38MAPK- TGF-βl /Smad通路上的主要蛋白的起到了调控作用，从而明确了其作用靶点。在TAA诱导的小鼠肝纤维化模型研究中发现，25-OCH3-PPD对TAA诱导的小鼠血清转氨酶ALT和AST的升高具有抑制作用。对TAA诱导肝纤维化模型小鼠肝脏细胞中炎性通路线管蛋白MAPKs /ERK、P38和JNK磷酸化的蛋白表达具有调节作用，研究还发现抗肝纤维化作用机制与调节α-SMA，Collagen-I，MMP-13/ TIMP-1，HIF-1α，TLR4，CD14蛋白，抑制HSCs活化与增值，减少ECM的合成，降低肌纤维和胶原纤维的表达有关。本项目不仅在定向发现高效低毒的作用机制明确的肝纤维化疾病保护剂及其先导化合物方面具有重要的科学意义，同时亦可为高效低毒的肝纤维化保护剂的研究开发奠定坚实的物质基础。