DExH/D-box RNA 解螺旋酶RHA重塑RNA结构与调控口蹄疫病毒RNA复制的分子机制

RNA helicases are ubiquitous in plants and animals, and play essential roles in almost every aspect of RNA metabolism, as well as virus RNA replication. The idea of this project is to use the DExH/D-box RNA helicase A (RHA) as a model system. First, by using biochemical and molecular biological methods, we will investigate the molecular mechanism of how RHA remodel the synthetic model RNA substrates, and the ATP utilization by RHA; second, by using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM), we will further investigate how RHA regulates the interaction between 3'-UTR and 5'-UTR of foot-and-mouth disease virus (FMDV) RNA and how this regulation is affected with the formation of ribosome subunit-mRNA complex at the internal ribosome entry site (IRES) of FMDV in real time. Based on these studies, we try to elucidate the mechanism of RNA remodeling and RNA virus replication regulation by RHA on the molecular basis. These fundamental investigations will be informative to develop antiviral therapy that selectively discriminates between the cellular and viral RNA targets of RHA.

DExH/D RNA 解螺旋酶普遍存在于植物和动物中，对细胞RNA的代谢和加工的各个方面都起到不可或缺的作用，同时也调控病毒RNA的复制。本项目以DExH/D-box RNA解螺旋酶A（RHA）为研究对象，综合利用生物化学、分子生物学系统研究RHA重塑模板RNA结构及利用ATP的机制，在此基础上，利用单分子荧光技术，探索RHA解螺旋酶与口蹄疫病毒RNA的相互作用以及病毒RNA翻译初始复合体形成对RHA与口蹄疫病毒RNA相互作用的影响。通过以上研究，旨在分子水平上，了解RHA重塑RNA结构和调控病毒RNA复制和翻译的机制，为开展可以选择性的区分RHA底物是细胞RNA还是病毒RNA的抗病毒治疗提供依据。

DExH/D RNA 解螺旋酶普遍存在于植物和动物中，对细胞RNA的代谢和加工的各个方面都起到不可或缺的作用，同时也调控病毒RNA的复制。本项目以DExH/D-box RNA解螺旋酶A（RHA）为研究对象，综合利用生物化学、分子生物学系统研究RHA重塑模板RNA结构及利用ATP的机制。研究发现：通过杆状病毒表达系统体外获的全长RHA具有解旋活性，并且其活性高低受温度，盐离子浓度和ph等因素影响。RHA以ATP依赖和多聚的形式参与双链RNA的解旋反应，该过程不仅需要ATP的结合，还需要ATP水解。另外，底物下链（loading strand）磷酸-核糖骨架的完整性是RHA发生有效解旋的必要条件。底物单链区的核酸成分则直接影响RHA的结合效率。在此基础上，本项目还利用单分子荧光技术，探索了RHA与RNA的相互作用，发现RHA能够揭开RNA双螺旋结构，并逆热力学定律促进稳定构象向不稳定构象转变。