科罗索酸调控TRPM8抑制肝癌细胞增殖的分子机制研究

In our early studies, we found that, the triterpenes in the Actinidia valvata remarkably induced apoptotic cell death in cancer cell. The apoptosis induction was foud to be connected to the calcium channels in the cell membrane. The calcium is a important factor in the apoptotic sigal. Transient receptor potential (TRP) channels are non-selective calcium channels. According to the early study, we hypothesised that, TRPM8 act a key in cancer cell apoptosis and proliferation, and maybe regulated by the triterpenes, such as the corosolic acid. The orthotopic tumor transplantation model and the gene interference will be introduced for researching the expression and function of TRPM8. By investigation the calcium level and the proliferation in cancer cells, the effects of TRPM8 in hepatoma carcinoma cell growth and will be discussed. The researches of the regultion of TRPM8 by the triterpenes in cancer cell will provide new targets for liver cancer therapy as well as expanding new space for triterpenes in cancer therapy.

课题组的前期工作发现，猫人参化学成分中的科罗索酸等三萜类物质可明显抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞凋亡，此凋亡诱导作用可能与肿瘤细胞膜钙离子通道相关。也有研究表明，科罗索酸可剂量依赖性的抑制蛋白激酶C的活性。TRPM8是一种新发现的非选择性钙离子通道，受雄激素调控转录及蛋白激酶C调控磷酸化水平，本研究根据预实验结果,提出TRPM8在肿瘤增殖、凋亡中起着重要作用，并可能受科罗索酸等三萜类物质的调控。本项目利用原位移植瘤模型、肝癌细胞模型及基因干预等技术研究TRPM8的表达和功能，证实TRPM8在肝癌细胞增殖中的作用，选择科罗索酸为三萜类物质代表，研究对肿瘤细胞中TRPM8的表达水平及磷酸化调控，为肝癌的治疗寻求新的靶标，为三萜类物质在肿瘤治疗中的应用拓展新的空间。

课题组的前期工作发现，猫人参化学成分中的科罗索酸等三萜类物质可明显抑制宫颈癌细胞的生长，诱导细胞凋亡，本研究发现，科罗索酸也可明显抑制肝癌细胞的生长，并诱导肝癌细胞凋亡，肝癌细胞的诱导与caspase3酶活性相关，此凋亡诱导活性可能是通过影响磷酸化Akt进而改变磷酸化PI3K的表达，从而引起肝癌细胞凋亡。本课题还对分化群分子166（CD166）与黑色素细胞粘附分子（MACM）在肝癌细胞中的相互作用。CD166对MCAM的表达由正向作用，而MCAM对CD166没有相同作用。组织芯片分析提示CD166与MCAM的表达有一致性。过表达MCAM可以逆转由于CD166耗竭导致的抗肿瘤作用，因此，MCAM在CD166诱导的肝肿瘤生成中具有重要的功能作用。而且，研究发现CD166主要通过抑制泛素介导的MCAM蛋白降解起作用。CD166下调了两个泛素E3连接酶，βTrCP 和 Smurf1，此两个酶对MCAM蛋白的稳定起重要作用。另外，MCAM可以部分的逆转由于βTrCP 和 Smurf1的过表达而减弱的表型转化，因此MCAM可能是βTrCP 和 Smurf1的作用靶标。而且，研究发现c-Raf/MEK/ERK信号通路是刺激βTrCP 和 Smurf1范素化和稳定性的CD166/PI3K/AKT信号的下游效应信号。CD166通过调节活化 PI3K/AKT 和 c-Raf/MEK/ERK信号磷酸化，抑制βTrCP和Smurf1，从而抑制MCAM的范素化降解来调节MCAM，这一信号通路可能为CD166及MCAM依赖性的肝细胞癌治疗提供有效途径。