调节性T细胞（Tregs）参与非结核分枝杆菌慢性感染分子免疫调节机制的研究

Nontuberculosis mycobacteria and Mycobacterium tuberculosis both belong to mycobacterium,its solo infection or coinfection with Mycobacterium tuberculosis can cause morbidity of human beings and animals,moreover,the morbidity rate upgrades gradually and the hazard become more and more serious.Now,the molecular immune mechanism of Nontuberculosis mycobacteria infection is not clear.On the basis of Nontuberculosis mycobacteria separated from different animals and authenticating its influence on bovine tuberculosis immunoeffect,this research will establish animal models of C57BL/6 and humanize mouse. In order to reveal the molecular immune regulation mechanism of Tregs in Nontuberculosis mycobacteria chronic infection initially, first of all, the influence of screening Tregs on Nontuberculosis mycobacteria chronic infection will be studied with antibody neutralization, flow cytometry, ELISA, etc. Moreover, the expression of cytokine, pathological change and bacterium quantity after Nontuberculosis mycobacteria infection will be analyzed in lack of CTLA-4,IL-10 and TGF-β. I believe that the mechanism of Tregs molecular immunoregulation during Nontuberculosis mycobacteria chronic infection will be revealed in this study. It is very important for riching the basic immunology theory of Nontuberculosis mycobacteria and improving the effectiveness of vaccine.

非结核分枝杆菌（NTMs）与结核杆菌同属分枝杆菌属，其单独或与结核杆菌共感染均引起人和动物发病，且发病率不断上升，危害越来越严重。目前，有关NTMs感染的分子免疫机制尚不清晰。本研究在已分离到的不同动物源NTMs和确证其影响牛结核免疫效果的基础上，拟建立NTMs感染C57BL/6小鼠和人源化小鼠动物模型；应用抗体中和、流式细胞术、酶联免疫法等免疫学技术研究屏蔽调节性T细胞（Tregs）对NTMs感染小鼠慢性感染的影响；缺乏CTLA-4、IL-10和TGF-β时，小鼠感染NTMs后细胞因子的表达、病理变化以及细菌量等指标的变化，据此分析CTLA-4、IL-10、TGF-β等对Tregs在慢性感染免疫调节中的作用，旨在初步揭示Tregs参与NTMs慢性感染分子免疫调节机制，为进一步丰富NTMs基础免疫学理论、提高疫苗免疫效力具有重要意义。

非结核分枝杆菌，又称环境分枝杆菌或非典型分枝杆菌，广泛存在于外部环境和动物体内，临床感染率和检出率极高。目前，关于非结核分枝杆菌的研究主要集中在分离鉴定以及人类感染非结核分枝杆菌的免疫反应等方面，关于动物感染非结核分枝杆菌的免疫、致病机制研究却知之甚少。本研究首先利用临床分离的浅黄分枝杆菌和母牛分枝杆菌感染C57BL/6小鼠建立动物模型，分析感染后小鼠的免疫动力学变化及Tregs对非结核分枝杆菌感染的调控作用。结果发现，感染鼠肝脏、脾脏和肺脏均出现不同程度的病理变化，且脾脏中IFN-γ的表达量显著高于对照组，说明非结核分枝杆菌感染免疫反应主要以TH1反应为主。另外，T细胞对非结核分枝杆菌感染的调控作用结果显示，感染初期，小鼠脾脏内主要以CD4+T细胞为主，随后下降，21天后，CD4+T细胞比例逐渐升高，而CD8+T细胞比例逐渐下降。课题组为了进一步研究非结核分枝杆菌的免疫反应，从牛、猪、鹿体内大量的采集样本分离非结核分枝杆菌，通过16SrRNA PCR、透射电镜及基因组测序分析，最终获得2株新金分枝杆菌，1株耻垢分枝杆菌和1株胞内分枝杆菌。利用分离的新金分枝杆菌感染小鼠，分析感染后小鼠体内Tregs表型的变化。结果发现，小鼠体内调节性T细胞主要以CD4+CD25+FoxP3+Tregs为主，比例达到2%左右。MTT增殖抑制试验结果显示，细胞抑制率达到89.8%。本课题研究结果为进一步分析非结核分枝杆菌感染免疫致病机制提供了理论依据.