布鲁氏菌外膜蛋白OMP31在细胞凋亡中的调控研究

布鲁氏菌可长期寄生于巨噬细胞并抑制感染细胞的凋亡，引起人、畜多器官损伤和慢性感染，给人类健康和畜牧业和谐发展带来严重威胁。在国家自然科学基金的支持下，前期通过酵母双杂交已证明布鲁氏菌外膜蛋白OMP31与巨噬细胞趋化因子配体16为互作蛋白。现有研究表明：⑴趋化因子配体16与抑制细胞凋亡有关；⑵布鲁氏菌OMP31基因缺失显著降低布鲁氏菌的胞内生存能力。本研究拟通过：⑴构建布鲁氏菌16 M标准株omp31基因缺失株；⑵分别用缺失株和16 M标准株感染鼠巨噬细胞和SPF小鼠，在不同感染阶段对细胞上清、感染细胞及受试鼠脾脏进行ELISA、RT-PCR、CFU、共聚焦显微镜、FCS等检测，对细胞因子、凋亡分子、细胞凋亡率等进行考察。在分子、细胞和个体水平分析布鲁氏菌△omp31缺失株和16 M标准株在细胞凋亡中的差异，为进一步揭示布鲁氏菌对感染细胞的抗凋亡机制和进行慢性布病患者的药物选择提供科学依据。

圆满完成任务书规定的任务。成功构建布鲁氏菌标准株16M omp31基因缺失株，用标准株和基因缺失株在不同时间阶段侵染巨噬细胞和小鼠，得出以下结论：布鲁氏菌外膜蛋白OMP31在布鲁氏菌抑制感染细胞凋亡过程中起重要作用，OMP31通过TNF-α受体通路，经Bax/Bcl-2-CytC途径调控感染巨噬细胞的凋亡进程。在研究过程中，发表SCI文章1篇，待刊SCI文章1篇，发表中文核心期刊5篇，待刊中文核心期刊3篇，共同申请国家发明专利1项，向GenBank登陆22条共享序列，培养研究生4名，其中3名已毕业。