拮抗HCV RdRP活性的人ScFv的制备及阻断病毒复制的研究

丙型肝炎病毒（HCV）NS5B蛋白是RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP),在病毒基因组复制中起着关键作用，是抗HCV的理想靶点。本项目在体外证实纯化NS5B蛋白的抗血清能够拮抗其酶活性的基础上，拟应用分子生物学技术，以HCV阳性患者的外周血B淋巴细胞为材料，扩增全套重链可变区和轻链可变区的基因，构建人scFv抗体DNA文库及其核糖体展示模板；以重组的NS5B蛋白为包被抗原，应用核糖体展示技术从中筛选并分离抗NS5B蛋白的scFv基因；将筛选到的scFv基因与蛋白穿膜结构域（PTD）编码基因融合进行原核分泌表达，通过体外酶活性测定实验筛选拮抗NS5B蛋白催化活性的PTD-scFv；进而用HCV复制子系统研究其阻断病毒复制的效率。本研究的完成为运用核糖体展示技术制备人源性治疗抗体开辟新途径，研究结果将为利用人单链抗体作为治疗抗体抗HCV研究提供重要的理论和实践意义。