反转录转座子对白念珠菌耐药性形成的调控机制研究

在其他各种生物中，已广泛证明反转录转座子对生物的适应和耐药性具有广泛的调控作用，但未见有关反转录转座子调控白念珠菌适应性和耐药性的研究报道。本课题前期研究首次发现，反转录转座子Zorro2和Tca4转座激活与白念珠菌耐药性形成相关。因此，本课题拟以白念珠菌反转录转座子Zorro2、Tca4为代表，研究不同刺激因素对白念珠菌反转录转座子的转座激活作用及其在白念珠菌耐药性形成中的作用，并考察反转录转座子的转座方式与耐药性形成之间的关系及调控机制，以发现白念珠菌耐药性形成调控新机制，为寻找抗真菌新药靶，创建抗真菌药物筛选新模型，设计开发抗真菌创新药物，从而克服真菌耐药性，防治日益严重的深部真菌感染具有重要意义。同时，也为进一步研究反转录转座子对白念珠菌其他适应性的调控作用，以及研究白念珠菌反转录转座子更广泛的生物活性奠定工作基础。

在其他各种生物中，已广泛证明反转录转座子对生物的适应和耐药性具有广泛的调控作用，但未见有关反转录转座子调控白念珠菌适应性和耐药性的研究报道。本课题前期研究首次发现，反转录转座子Zorro2和Tca4转座激活与白念珠菌耐药性形成相关。因此，本课题拟研究不同刺激因素对白念珠菌反转录转座子的转座激活作用及其在白念珠菌耐药性形成中的作用，并考察反转录转座子的转座方式与耐药性形成之间的关系及调控机制。.本课题在执行期间，考察了白念珠菌反转录转座子在药物、H2O2、极端温度、渗透压改变、营养缺陷等不同条件刺激后的转录激活情况及对耐药性的影响；利用MCZ长期诱导SC5314形成的耐药菌株研究发现，反转座子Tca4发生了一种“剪切-不粘贴”的转座行为，区别于其他已报道的反转座子（如Tca2）的“复制-粘贴”或“剪切-粘贴”的转座行为；发现，反转座子Zorro2，Zorro3发生“剪切-粘贴”转座行为：诱导菌与亲本菌相比，拷贝数不变但是条带位置发生变化，RNA表达升高，提示反转座子Zorro2、Zorro3转座激活后，转座到基因组的其它位置。因此本课题利用Tail PCR方法，考察Zorro2，Zorro3发生转座后转移到的位置，证明转座子Zorro 3在转座后插入到白念珠菌1号染色体的CDC3（ORF 19.1055）基因的1104-1344 bp位置。该基因对白念珠菌的适应性有重要影响，与酿酒酵母中的Cdc3p同源，其表达的下调与真菌对唑类的抗药性有关，推测Zorro3发生转座后插入到了CDC3内部，从而影响了真菌的耐药性。.本课题研究发现了转座子调控白念珠菌耐药性形成的新机制，为寻找抗真菌新药靶，创建抗真菌药物筛选新模型，设计开发抗真菌创新药物，从而克服真菌耐药性，防治日益严重的深部真菌感染具有重要意义。