缺氧靶向调控表达的长非编码RNA-UCA1在卵巢癌恶性进展中的作用及其机制研究

Ovarian cancer is the most lethal malignant tumor in female reproductive system and metastasis is the major cause of the death of ovarian cancer patients, but its mechanism is still unclear.Hypoxia is a vital factor for inducing EMT and tumor development in solid tumor. HIF1α is a key transcription factor under hypoxia condition, which also plays an important role in malignant progression of ovarian cancer. LncRNAs play a crucial role in tumor progress. We previously screened and cloned lncRNA UCA1. We discovered that HIF1α could up-regulate UCA1 expression in SKOV3 cells under hypoxia. Exogenous expression of UCA1 in SOKV3 cells enhanced migration and invasion ability of cells, which suggested that UCA1 might play an important role in malignant progression of ovarian cancer. Accordingly, we will further confirm the regulation between UCA1 and HIF1α, and illuminate the role of UCA1 in malignant progression of ovarian cancer. This study will be an important theoretical foundation for ovarian cancer therapeutics.

卵巢癌是高致死性的女性生殖系统恶性肿瘤，转移是造成卵巢癌患者死亡的重要原因，但是其内在机制尚未明确。缺氧是实体肿瘤微环境的重要特征，也是诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化的重要因素。HIF1α是介导细胞缺氧反应的重要调控因子，在卵巢癌恶性进展中发挥关键作用。长非编码RNA在肿瘤发生发展中起着重要作用，项目组前期筛选并克隆出长非编码RNA UCA1，发现缺氧条件下HIF1α可以促进卵巢癌细胞中UCA1表达，外源性表达UCA1能增强SKOV3细胞迁移及侵袭能力，同时上调HIF1α的mRNA表达，提示UCA1在卵巢癌恶性进展中具有重要作用。据此，本项目拟进一步研究HIF1α和UCA1之间的调控关系，阐明UCA1在卵巢癌恶性进展中的具体作用及其分子机制，为卵巢癌侵袭转移研究和临床治疗奠定重要的理论基础。

卵巢癌是高致死性的女性生殖系统恶性肿瘤，转移是造成卵巢癌患者死亡的重要原因，但是其内在机制尚未明确。缺氧是实体肿瘤微环境的重要特征，也是诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化的重要因素。HIF1α是介导细胞缺氧反应的重要调控因子，在卵巢癌恶性进展中发挥关键作用。长非编码RNA在肿瘤发生发展中起着重要作用，项目组前期筛选并克隆出长非编码RNA UCA1，发现缺氧条件下HIF1α可以促进卵巢癌细胞中UCA1表达。我们通过染色质免疫共沉淀（ChIP）实验和凝胶迁移阻滞（EMSA）实验证实HIF1α可结合UCA1启动子区，并通过双荧光素酶报告基因实验精细定位出HRE位点。我们利用表达载体在卵巢癌细胞中外源性表达UCA1或shRNA干涉载体敲低UCA1并构建稳转细胞系，通过实验观察到UCA1对卵巢癌细胞增殖、周期、凋亡、侵袭及迁移能力都有不同程度的影响，可促进卵巢癌恶性进展。我们应用Western blot技术检测mTOR、HIF1α 以及相关分子表达改变，实验结果显示UCA1表达与E-cadherin负相关，与p-mTOR、HIF1α、Vimentin正相关，用雷帕霉素抑制p-mTOR可降低过表达UCA1所引起的HIF1α表达升高，揭示UCA1通过激活mTOR通路上调HIF1α表达，促进SKOV3细胞发生EMT。随后，我们建立了稳转细胞系的裸鼠皮下移植瘤模型，监测裸鼠体重和移植瘤体积的变化，收集瘤组织拍照，并应用免疫组化技术检测mTOR、HIF1α 以及相关蛋白的表达，体内验证了UCA1在卵巢癌恶性进展中的作用和机制。本项目证明了HIF1α和UCA1的调控关系，阐明UCA1在卵巢癌恶性进展中的具体作用及其分子机制，为卵巢癌侵袭转移研究和临床治疗奠定重要的理论基础。