多位点Ribozyme抑制乙肝病毒基因表达的研究

本研究根据锤头状核酶切割靶RNA的分子模型，通过计算机对HBV C基因mRNA二维结构进行分析并设计了针对C基因mRNA的三个单一核酶及三个串联的特异联合型核酶。将合成的核酶基因构建入带有自剪切核酶的体外转载体中（PGEmRZ1、PGEmRZ2、PGEmRZ3、PGEmRZ12、PGEmRZ23、PGEmRZ13和PGEmRZ123），上述质粒经体外转录后形成核酶RZ1、RZ2、RZ3、RZ12、RZ23、RZ13、RZ123。用放射自显影观察核酶对靶RNA的切割作用，结果表明单一、双位点及特异三联核酶均可切割靶RNA，多位点核酶可提高单一核酶的切割效率，最高达87%。将核酶RZ23、基因导入HepG2-2.2.15及人肝癌细胞后，可明显抑制HBeAg的表达，抑制率分别为48%和65%，而对HBsAg无明显抑制作用。结果表明核酶可抑制乙肝病毒基因表达。