S100B/Ahank对冷应激血管平滑肌收缩反应性的调控作用

Cold stress plays an important role in the developement of hypertension. Vascular hyperreaction induced by cold stress is the direct factor． The mechanism may be involved in the abnormally opening and activation of calcium channels by Cold stress.The Giant Protein AHNAK as the major and most specific Ca2+-dependent zinc-binding S100B target Protein implicated in calcium flux regulation.we propose that the S100B-AHNAK interaction may participate in the S100B-mediated regulation of cellular Ca2+ homeostasis in vascular smooth muscle cells after low temperature exposure.In our previous studes,we found that the expression of S100B increased after cold stress,which imply S100B-AHNAK play an important in regulator the high contranctile reaction of VSMC after cold stress.In this study,we will use such method as RT-PCR,Western blot,Patch,immunoblotting,gene transfection to study the relationship between S100B/AHNAK and high vascular contractlie reaction;Moreover investigated the effect of S100B/AHNAK on calcium channels and contractile protein;further induced the mechanism of S100B/AHNAK role on VSMC contraction.Our study may provide new theory and therapy target for hypertention diseases induced by cold stress.

流行病学调查显示，寒冷是诱发高血压发病的重要环境因素之一。血压升高的直接原因是血管平滑肌细胞(VSMC)收缩反应性增高。胞内钙则是影响VSMC收缩反应性的关键因素。研究表明，钙结合蛋白S100B与桥粒联结蛋白（Ahnak）结合，增加L型钙通道开放，可能与VSMC钙稳态的调控有关。目前，S100B/Ahnak在冷应激VSMC收缩反应性增高作用尚不明确。我们前期实验发现，大鼠冷应激后血管S100B表达增加。因此，我们推测S100B/Ahnak可能在冷应激VSMC收缩反应性增高发生中起重要作用。本课题拟运用RT-PCR、Western blot、膜片钳、基因转染等方法，研究冷应激大鼠血管S100B/Ahnak变化与血管收缩反应性的关系；观察S100B/Ahnak对钙通道结构功能及收缩相关蛋白的影响；探讨S100B/Ahnak在冷应激VSMC收缩反应性增加的作用机制，为防治冷应激高血压提供新思路。

寒冷是引起高血压发病的重要环境因素之一。血管平滑肌（VSMC）收缩反应性增高是冷应激高血压发生的直接原因。胞浆钙浓度决定VSMC收缩反应性的一个重要因素。在高血压的发生中起着关键性作用。钙结合蛋白S1OOB是钙信号的媒介，在细胞信号传导途径中起着非常重要的作用,对细胞内Ca2+浓度有重要调控作用。Ahnak作为S100B的特异性靶标蛋白,是S100B调控钙稳态的媒介，研究表明S100B与Ahnak特异性结合形成复合物共同调控L型钙通道的功能。目前S100B/Ahnak与冷应激VSMC 收缩反应性及Ca2+通道之间关系尚不明确。本课题旨在研究冷应激后大鼠动脉血管收缩反应性与S100B/AHNAK的表达水平的变化冷应激对大鼠主动脉VSMC胞内Ca2+浓度、L-型Ca2+通道结构和功能的影响分析S100B和Ahnak变化与L-型Ca2+通道的结构功能变化的相关性改变主动脉VSMC内、外S100B的含量对血管收缩反应性的影响及机制。结果发现：寒冷暴露组血压(140±7.07)明显高于对照组(103.03±8.76)冷应激后动脉血管及血管平滑肌收缩反应性的变化；主动脉环舒缩功能测定结果：L-型Ca2+ 通道开放剂 Bayk 8644引起主动脉收缩反应性明显高于对照组（p<0.05）免疫荧光结果显示：实验组主A血管平滑肌S100B、Ca2+通道b亚单位表达明显高于对照组，（14.02±0.93，45.12±2.21）：（18.9±2.0，50.8±2.77）主A血管平滑肌实验组主A血管平滑肌Ahnak表达低于对照组但无统计学意义。实时荧光定量PCR检测显示实验组主A血管平滑肌S100B、Ca2+通道β亚单位mRNA表达明显高于对照组(P＜0.05)，2－△△CT分别为5.31-3.92；31.34-3.86；而Ahnak mRNA表达有升高趋势，2－△△CT为2.43-1.54但与对照组无统计学意义。通过以上结果，验证Ca2+通道的结构功能的改变确是引起冷应激高血压的关键因素，S100B作为钙信号的媒介在其中可能起到重要调节作用，为防治冷应激高血压提供新思路。