基于OPG/RANKL/RANK轴及其关键分子探讨扶正解毒化瘀中药益肾骨康方防治骨转移癌的作用机制

Bone metastasis is a common complication in patients with advanced malignant tumor, which seriously affects the quality of life and the dignity of life. The multi target therapy of traditional Chinese medicine has a good prospect of research and development. Our previous clinical studies have shown that Yishen Gukang formula can improve the quality of life of patients, relieve the pain of bone metastasis, and inhibit the incidence of bone metastasis of osteolytic bone metastasis model in nude mice, through up-regulated the expression of OPG protein in bone tissue of transfer, and down-regulated RANKL expression. Based on our previous research，this research investigates the internal mechanism of OPG/RANKL/RANK axis and key molecule expression of IL-8、PTHrP、MCSF、IL-6 under the intervention of Fuzheng Jiedu Huayu decoction of Yishen Gukang formula to inhibit bone metastasis of lung cancer and relief pain. This study helps to identify whether there is a synergistic effect between Chinese medicine Fuzheng and Quxie treating cancer bone metastasis，and it also provides the experimental evidence for the clinical application of different traditional Chinese medicine treating cancer bone metastasis.

骨转移是晚期恶性肿瘤常见并发症，严重影响患者生活质量及生命尊严，中医药的多靶点治疗有很好的研发前景。我们前期临床研究显示中药益肾骨康方可提高骨转移患者生存质量、减轻骨转移疼痛；预实验显示其可抑制肺癌溶骨性骨转移造模裸鼠骨转移发生率，上调骨转移组织中OPG蛋白表达，下调RANKL表达。本课题在既往研究基础上，基于OPG/RANKL/RANK轴及其关键分子IL-8、PTHrP、MCSF、IL-6的表达，探讨其抑制肺癌骨转移及疼痛的机制。实验拆方设计区分不同中医治则，通过体外体内实验观察中药干预前后癌细胞生物学行为表现及基因蛋白改变；通过大鼠胫骨种植肺癌细胞造模，应用影像学检查、疼痛实验等观察干预前后骨转移癌形成情况及疼痛指标，并应用Q-PCR、免疫组化等检测相应基因及蛋白表达水平。本研究有利于明确中医扶正与祛邪治则对骨转移治疗是否存在协同作用，为临床应用不同中药治疗癌症骨转移提供基础实验证据。

骨转移是晚期恶性肿瘤常见的并发症，严重影响患者的生活质量及生命尊严，中医药的多靶点治疗有很好的研发前景。前期临床研究显示中药益肾骨康方可提高骨转移患者生活质量、减轻骨转移疼痛；预实验显示其可抑制肺癌溶骨性骨转移造模裸鼠骨转移发生率。本课题在既往研究的基础上，基于OPG/RANK/RANKL轴探讨其抑制骨转移及疼痛的机制。利用动物实验探讨该方对骨转移癌造模大鼠行为学、影像学、病理及OPG、RANK、RANKL蛋白表达的影响。通过细胞实验研究不同浓度益肾骨康方干预肺癌细胞（A549）后，对其生长、粘附、迁徙、侵袭能力的变化；扫描电镜观察肿瘤细胞表面超微结构的改变。转录组基因测序检测不同浓度中药干预后对肺癌细胞（A549）基因表达的影响。研究结果显示，动物实验：大鼠机械性痛阈值：造模后第14天，解毒化瘀组（P=0.046）、低剂量组（P=0.018）机械性痛阈值高于模型组；X线检查：造模后第14天，模型组和给药组大鼠胫骨单侧骨皮质破坏，髓腔内密度不均，模型组大鼠胫骨局部破坏明显，呈虫蚀状。骨密度检测：扶正组（P=0.022）、低剂量组（P=0.017）、高剂量组（P=0.033）平均骨密度均高于模型组；WesternBlot：低剂量组、高剂量组RANK表达低于模型组（P<0.05)；解毒化瘀组、扶正组RANKL表达低于模型组（P<0.05）；细胞实验：与对照组比较，益肾骨康方干预降低了A549细胞的增殖、迁移、粘附、侵袭能力；基因检测分析发现益肾骨康方抑制肺癌A549细胞主要涉及到细胞凋亡、炎症、免疫等方面，相关通路主要有细胞凋亡、癌症中的蛋白多糖、局灶性粘连、肌动蛋白细胞骨架的调节、MAPK信号通路、FcγR介导的吞噬作用、FoxO信号通路、癌症的途径、Th17细胞分化、破骨细胞分化、肿瘤坏死因子信号途径、HIF-1信号通路、粘合连接、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药、PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路内吞作用、p53信号通路、细胞衰老等。