靶向调控p53-mdm2通路对前庭神经鞘膜瘤生长特性的影响

merlin deficiency or inactivated is well recognized to be associated with vestibular schwannoma initiation or progression. Our previous studies indicated that non-functional merlin exerts its proliferative effect,at least in part,mediated by p53-mdm2 pathway.However,the influence on vestibular schwannoma cell proliferation by targeting p53-mdm2 signaling has remained obscure. Therefore,in this study,we use primary vestibular schwannoma cell、human schwann cell(HSC)、vestibular schwannoma cell line（HEI-193）in vitro to test the activity of merlin and p53-mdm2 signaling involved in tumor development.In order to mimc tumorigenesis of schwannoma,we silence the merlin gene expression in HSC through RNA interference strategy,then we investigate the effect of merlin on p53-mdm2 pathway and the underlying mechanism.At last,we study the inhibitory potential of drug targeting p53-mdm2 pathway in primary cells and HEI-193,systematically analyze cell proliferation characteristics and relevant biochemical changes,thus provide new thought on controlling vestibular schwannoma growth.

merlin缺失或失活在前庭神经鞘膜瘤发生发展中具有重要作用。我们前期工作提示merlin失活诱发的促增殖效应至少一部分由p53-mdm2通路介导，但靶向调控p53-mdm2通路对前庭神经鞘膜瘤细胞生长特性的影响尚不明确。本课题拟采用体外培养的原代前庭神经鞘膜瘤细胞、前庭神经鞘膜瘤细胞系（HEI-193）与健康神经鞘膜细胞系(HSC)在细胞水平上探究merlin与p53-mdm2通路在前庭神经鞘膜瘤发展过程中的活性变化；然后通过RNA干扰技术抑制HSC细胞merlin表达以模拟前庭神经鞘膜瘤发生，全面观察merlin对p53-mdm2通路的影响及作用途径；最后通过药物靶向调控原代细胞、HEI-193的p53-mdm2通路，系统分析细胞生长特性及关键信号改变，为控制前庭神经鞘膜瘤生长提供新思路。

听神经瘤为侧颅底外科和耳神经外科最常见的良性肿瘤，以听力下降、耳鸣为典型临床表现， 由于其生长位置的特殊性，瘤体增大可压迫脑干产生严重症状、威胁患者生命。本研究通过体外培养的原代听神经瘤细胞、听神经瘤细胞系HEI-193、神经鞘膜细胞株RT4与神经鞘膜细胞系HSC探究 merlin 与 p53-mdm2 通路在肿瘤发展过程中的活性变化；通过 RNA 干扰技术抑制HSC细胞 merlin 表达模拟神经鞘膜瘤发病，全面观察 merlin 对p53-mdm2 通路的影响及作用途径；最后通过药物靶向调控原代肿瘤细胞、HEI-193和RT4细胞的 p53-mdm2通路，系统分析细胞生长特性及关键信号改变，为控制听神经瘤的生长提供新思路。实验结果显示：HSC细胞NF2基因沉默能导致merlin-p53抑瘤信号下调，MDM2信号升高，明显促进细胞增殖; 而在MDM2-/- HSC中merlin蛋白沉默不能引起p53信号下调，不能促发明显细胞增殖效应；蛋白分析显示肿瘤组织MDM2异常升高，merlin-p53共同失表达，这与merlin沉默模拟的神经鞘膜细胞瘤变信号相呼应；体外药物实验显示，P53激活剂nutlin-3能明显抑制肿瘤细胞增殖，在蛋白水平上促进merlin-p53信号的表达，同时在亚细胞定位上调动merlin-p53信号由质到核的穿梭运动，从而最大限度发挥抑瘤效应。我们的研究表明，药物靶向调控p53-MDM2通路，逆转神经鞘膜瘤变失调信号，对于干预听神经瘤的早期发展和控制肿瘤生长可能具有重要意义。