小柴胡汤调控miR-122逆转肝癌多药耐药的作用机制

The existence of multidrug Resisitance (MDR) of tumor restraines the effect of chemotherapy on hepatocellular carcinoma (HCC) ,and attracting more and more attention. Down-regulation of miR-122 will promote MDR gene, anti-apototic gene and cyclins to up-expression, futhermor cell cycle dysfunction, all of which are the important mechanism of MDR. Xiao Chai Hu Tang (XCHT) is a classic prescription relieving shaoyang disorder, coming from Treatise on Febrile Diseases, XCHT has been shown to be effective in the clinical treatment of HCC and revering MDR, But its molecular mechanism has not been elucidated . Our previous studies suggest that,XCHT may exert its pro-apotosis, anti-proliferation and anti-angiogenesis function via affacting the expression of CDK4, CyclinD1, Bcl-2, VEGF and Bax, Moreover, XCHT can reverse the MDR induced by 5-Fu.To further investigate the pathogenesis of MDR of hepatocellular carcinoma and the precise molecular mechanisms of XCHT's therapeutic activity, in present project we will set up MDR of HCC animal and cell models, we using cell transfection, Real-time PCR, western blot to study the mechanism and target by which XCHT reverse MDR of HCC via regulating miR-122. Our findings in this project will provide theoretic foundation for clinical application.

肿瘤多药耐药（Multidrug Resistance, MDR）的存在极大地限制了肝癌化疗的效果,是目前肝癌研究的热点。其中，miR-122表达下调引起的MDR基因、抗凋亡基因以及细胞周期蛋白的表达上调，发生细胞周期调控异常等是肝癌MDR产生的重要机制。小柴胡汤是张仲景《伤寒论》中和解少阳的经典方，对肝癌治疗和逆转MDR具有显著疗效，但其作用机制尚未完全阐明。我们的前期研究发现小柴胡汤能抑制肝癌细胞CDK4、CyclinD1、Bcl-2和VEGF的表达，促进Bax表达从而诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞增殖和血管新生；并且可以逆转5-FU诱导的耐药。本课题在此基础上拟构建肝癌耐药的细胞和动物模型，运用细胞转染、Real-time PCR、western blot等方法系统地研究小柴胡汤调节miR-122逆转肝癌多药耐药的机制及靶点，为临床应用提供理论根据。

肿瘤多药耐药（Multidrug Resistance, MDR）的存在极大地限制了肝癌化疗的效果,是目前肝癌研究的热点。其中，miR-122 表达下调引起的 MDR 基因、抗凋亡基因以及细胞周期蛋白的表达上调，发生细胞周期调控异常等是肝癌 MDR 产生的重要机制。小柴胡汤是张仲景《伤寒论》中和解少阳的经典方，对肝癌治疗和逆转 MDR 具有显著疗效，但其作用机制尚未完全阐明。本研究通过体内外实验研究小柴胡汤对肝癌多药耐药的逆转作用，并探讨其机制及作用靶点。.研究内容分为体外实验和体内实验两个部分。体外实验通过MTT法、流式细胞术、集落形成实验、Hoechst33258染色、荧光素酶报告基因检测法、高效液相色谱仪（HPLC）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot法等观察小柴胡汤对肝癌多药多药耐药的机制（增殖、凋亡和药物外排）的影响；体内实验应用裸鼠的皮下移植瘤耐药模型，检测小柴胡汤对多药耐药相关机制的影响。.体内外实验结果表明小柴胡汤能够逆转肝癌多药耐药；小柴胡汤逆转肝癌多药耐药机制可能有以下几个方面：（1）小柴胡汤显著抑制耐药细胞BEL-7402/5-FU细胞增殖；（2）小柴胡汤促进耐药细胞BEL-7402/5-FU细胞凋亡；（3）小柴胡汤抑制耐药细胞BEL-7402/5-FU细胞药物外排功能；（4）小柴胡汤调控miR-122及其靶基因促进BEL-7402/5-FU凋亡，抑制细胞增殖及药物的外排功能。.本研究探讨了小柴胡汤逆转肝癌多药耐药的作用机制，为肝癌的多药耐药临床应用提供了实验依据。