TAT表面修饰的pH敏感NEP1-40纳米水凝胶的研究

近年来，全球患有中枢神经系统（CNS）疾病的人数随着人口老龄化的加据而逐年增加，主要抑制受损神经再生的基因-Nogo及 NgR是国内外研究热点。NEP1-40作为NgR拮抗剂，具有高选择性和有效性使其成为治疗CNS疾病的新药。如何跨越血脑屏障，使损伤区域达到有效治疗浓度是研究的瓶颈问题。水凝胶纳米粒具有环境响应性以及纳米特性。本研究将采用超声自组装法制备平均粒径100nm, 对pH敏感，即在pH 7.4稳定性高，随pH降低直线性释放NEP1-40，TAT表面修饰的纳米水凝胶，真正实现缺血缺氧损伤区域靶向性、智能控制性释药。采用同位素标记技术、SPECT技术、高效液相色谱技术和组织内药物浓度的测定等技术检测纳米水凝胶系统的生物学性质及跨膜性能，研究纳米水凝胶对脑缺血再灌注损伤动物模型的保护作用，为开创治疗中枢神经损伤新方法、新技术提供理论依据并为临床应用奠定基础。

血脑屏障（BBB）能够防御循环中的分子或免疫细胞进入中枢神经系统，以维护大脑的内稳态。BBB是有大脑特有的内皮细胞即紧密连接(TJ)形成的。以往的研究证实，人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的Tat蛋白能够改变TJ蛋白的表达。但是，改变的机理并没有系统的研究。本研究选择闭锁蛋白为观察目标，研究了HIV-1的Tat蛋白对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)作用。Tat能够降低闭锁蛋白mRNA以及蛋白的表达水平，可能是由于抑制了RhoA 抑制剂C3 转移酶和ROCK 抑制剂Y-27632的增加，同时Tat能够诱导MMP-9的表达。小分子干扰RNA 沉寂MMP-9，可以减少可溶性闭锁蛋白的浓度，HBMECs渗透性显著增强。总之，HIV-1的Tat蛋白能够破坏BBB的完整性，可能是通过抑制TJ的闭锁蛋白的生成和组装而产生作用。. 壳聚糖(CS)/ 有机累托石(OREC)和海藻酸钠(alginate , ALG)，按照不同的混合比例交联，在Ca2+水溶液中包裹BSA而形成壳核结构的微球。光学显微镜和扫描电镜观察显示，形成了壳核结构的微球。傅里叶变换光谱和X-射线能量分散显示，OREC存在于微球中。小角X-射线衍射证实，CS链成功的插入OREC插层中。BSA的包封率和控释检测结果显示，与纯的CS/ALG形成的微球相比较，CO复合物所形成的微球药物释放率明显提高，且无论是在pH 1.2 或7.4环境下，也无论是释放初期或是持续释放期。. 成功制备了不同质量比的OREC-HTCC纳米粒子，呈圆球形，均匀，平均粒径约为30nm。红外图谱分析及纳米粒子的能谱分析均证实，HTCC插入了OREC插层中，BSA成功地包裹入OREC-HTCC混合材料制备的纳米微粒。加入OREC后，纳米粒子的包封率及载药量均明显提高，但随着加入量的增加，包封率及载药量逐渐减少。BSA 的释放有pH 响应性，在PBS 中BSA 的释放较低pH环境下的释放快，且HTCC：OREC为12:1时，控释效果最好。