人子宫内膜间充质干细胞外泌体miR-30b在子宫内膜损伤修复中的作用与机制研究

miR-30b was significantly rich in hEnMSCs exosomes by miRNA sequencing. Over-expression of miR-30b inhibited fibrosis of human endometrial stromal cells. Moreover, bioinformatics analysis and reporter gene assays revealed that Timp3 was the target gene of miR-30b. The results suggested that hEnMSCs may secrete exosomes containing miR-30b to inhibit endometrial fibrosis by down regulating TIMP3 expression. The mechanism of miR-30b, transported by exosomes derived from hEnMSCs, on regulating TIMP3 in human endometrial stromal cells will be investigated by over-expressing and knocking-down miR-30b, as well as rescue experiments. To date, there has been no relevant report about stem cells regulating endometrial fibrosis through exosomes, and also no relevant study about miR-30b regulating endometrial fibrosis. Our study is expected to provide new targets for the prevention and treatment of endometrial fibrosis.

miR-30b是我们通过miRNA测序技术筛选到的、差异性高表达于人子宫内膜间充质干细胞（hEnMSCs）外泌体（exosomes）的miRNA。前期研究发现：过表达miR-30b显著抑制人子宫内膜间质细胞纤维化，生物信息学分析和报告基因实验均证实TIMP3为miR-30b影响子宫内膜纤维化的调节靶标。因此，我们认为hEnMSCs exosomes通过转运miR-30b至子宫内膜间质细胞，下调TIMP3的表达，抑制子宫内膜纤维化，从而促进子宫内膜损伤后功能性修复。本研究拟进一步通过过表达/沉默exosomes中miR-30b及挽救实验，系统评估exosomes中miR-30b调控子宫内膜纤维化的分子机制。目前尚无干细胞通过exosomes影响子宫内膜纤维化的报道，也无miR-30b参与调节子宫内膜纤维化的报道，本研究如获成功，将为子宫内膜纤维化的防治提供新线索和潜在的干预靶标。

子宫内膜瘢痕性修复是常见而棘手的临床问题，其本质是子宫内膜纤维化，病理表现为细胞外基质（ECM）合成与分解失衡，ECM沉积，子宫内膜被纤维结缔组织取代。目前国内外现有治疗子宫内膜损伤后瘢痕性修复的方法由于不能从根本上解决子宫内膜纤维化，治疗效果不明显、易复发。miR-30b是我们通过miRNA测序技术筛选到的、差异性高表达于人子宫内膜间充质干细胞（EnMSCs）外泌体（exosomes）的miRNA。本研究在前期工作基础上，建立TGF-β1诱导的人/大鼠原代子宫内膜间质细胞纤维化模型，在细胞层面证实了：miR-30b与组织金属蛋白酶抑制因子3（TIMP3）靶向结合；外源性过表达miR-30b靶向TIMP3抑制TGF-β1诱导的子宫内膜间质细胞纤维化；通过在EnMSCs中沉默表达miR-30b，证实了EnMSCs exosomes转运miR-30b靶向TIMP3抑制TGF-β1诱导子宫内膜间质细胞纤维化。动物实验层面上，建立子宫损伤大鼠模型，通过在EnMSCs中沉默表达miR-30b，进一步在体证实了EnMSCs exosomes转运miR-30b靶向TIMP3抑制子宫内膜损伤后胶原沉积，促进子宫内膜损伤后组织再生和妊娠能力恢复。根据上述实验结果，我们得出结论：EnMSCs exosomes通过转运miR-30b至子宫内膜间质细胞，下调TIMP3的表达，上调活性基质金属蛋白酶2（active-MMP2）和活性基质金属蛋白酶9（active-MMP9）表达，抑制子宫内膜纤维化，从而促进子宫内膜损伤后功能性修复。目前尚无干细胞通过exosomes影响子宫内膜纤维化的报道，也无miR-30b参与调节子宫内膜纤维化的报道。本研究在分子生物学层面探索子宫内膜纤维化的发病机制，从源头寻找有效抑制子宫内膜纤维化的方法，为子宫内膜纤维化的防治提供了新线索和潜在的干预靶标，对于预防子宫内膜瘢痕性修复、促进子宫内膜损伤后功能性修复具有重要意义。