石榴皮鞣质类成分及其改善慢性肾脏疾病作用机制的研究

鞣质(tannin)是广泛存在于天然药用植物中的一类植物多元醇（酚）类化学成分，人们逐渐发现鞣质类化合物具有一系列显著生物活性，近些年来作为一类新的活性有机化合物群日益受到重视。石榴皮是石榴科安石榴属落叶小乔木栽培植物石榴（Punica granatum L.）的干燥果皮，研究证实石榴皮的主要活性成分为鞣质类化合物，其含量高达10.4%～21.3%。在前期对石榴皮的鞣质类成分及其生物活性的初步研究显示石榴皮鞣质具有开发研究价值。本项目是在前期研究基础上的拓展研究，前期发现并通过实验证实石榴皮鞣质具有改善慢性肾脏病（CKD）的作用，本研究将结合现代研究进展，从基因、蛋白水平以及代谢组水平上探讨石榴皮鞣质改善CKD的作用靶点及机制，通过活性追踪分离纯化工作，以期获得活性高、毒性小的先导化合物，为将石榴皮鞣质开发成一种新的、质量可控的改善CKD的纯天然有效药物提供科学依据。

石榴皮是石榴科安石榴属落叶小乔木栽培植物石榴（Punicagranatum L.）的干燥果皮，研究证实石榴皮主要活性成分为鞣质类化合物，其含量高达10.4%~21.3%。前期对石榴皮鞣质类成分及其生物活性的初步研究显示石榴皮鞣质具有开发研究价值。本项目是在前期研究基础上的拓展研究，结合现代研究进展，从基因、蛋白以及代谢水平上探讨石榴皮鞣质改善慢性肾脏疾病（CKD）的作用靶点及机制，并对石榴皮鞣质进行分离纯化及进一步活性追踪。结果发现：（1）石榴皮鞣质对大鼠单侧输尿管结扎诱导的肾间质纤维化和大鼠血清型慢性肾小球肾炎（CGN）均具有改善作用，能降低24小时尿蛋白、BUN、Scr水平，减少体内毒素，增强肾功能；肾脏病理切片均显示出不同程度的改善作用；代谢组学研究推测，石榴皮鞣质改善肾间质纤维化作用可能与苯丙氨酸代谢、氨基酸代谢、嘌呤代谢、糖代谢等多个代谢的有关，而其使CGN大鼠的内源性物质代谢恢复正常的作用机制可能与三羧酸循环、脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢等代谢过程相关；（2）石榴皮鞣质对大鼠被动型Heymann肾炎（PHN）和大鼠肾小球硬化均具有改善作用，可显著降低大鼠24小时尿蛋白、BUN、Scr等的水平，增高大鼠血清白蛋白等；HE和Masson染色结果表明，石榴皮鞣质对PHN模型和肾小球硬化大鼠病理损伤具有改善作用；免疫组化、间接免疫荧光法、Western Blot、PCR等研究表明其改善PHN作用与TGF-β1、C3及nephrin和podocin裂孔蛋白的表达有关，而改善肾小球硬化作用与MMP-1、Smad-7等蛋白表达水平有关；（3）HPLC-ESI-MS对石榴皮中鞣质类成分进行分析，初步鉴定出没食子酸、鞣花酸、安石榴磷、安石榴苷、鞣云实精等5种鞣质类化学成分；液质联用从灌胃石榴皮鞣质的大鼠尿液中检测到7种代谢产物，初步鉴定了其中尿石素B、甲基化尿石素A、尿石素A、葡萄糖醛酸化尿石素A、鞣花酸、尿石素C等6种代谢产物，由此推测石榴皮鞣质在大鼠体内可能的代谢途径；（4）CCK8实验考察8种石榴皮鞣质活性成分对TGF-β1诱导的HK2细胞增殖的影响，结果显示石榴皮鞣质提取物、没食子酸、甲基化尿石素A、尿石素A、尿石素B均有较强抑制细胞增殖作用。以上研究为将石榴皮鞣质开发成一种新的、质量可控的防治慢性肾脏疾病的纯天然有效药物提供了科学依据。