共轭亚油酸致低乳脂综合症分子机理的研究

本项目研究内容主要包括：采用现代生物化学、生理学和细胞生物学等学科相结合的方法，以纯品共轭亚油酸和奶牛乳腺上皮细胞为研究对象，研究共轭亚油酸致低乳脂综合症（MFD）的分子机制。首先研究共轭亚油酸对乳腺细胞增殖和细胞凋亡的影响；研究共轭亚油酸对乳腺上皮细胞脂肪酸合成及其关键酶基因表达的影响；研究共轭亚油酸对乳腺上皮细胞甘油三酯合成及其关键酶表达的影响；研究共轭亚油酸对乳腺细胞脂肪酸吸收和转运关键酶基因表达的影响。进而明确共轭亚油酸调控乳腺上皮细胞脂肪酸代谢的中心关键酶及该酶与其他酶的相互作用关系。通过本项目的实施应该对共轭亚油酸致低乳脂综合症有一个明确的认识。研究意义在于探讨共轭亚油酸致低乳脂综合症的分子机制，同时，由于共轭亚油酸能调控乳腺上皮细胞脂肪的代谢，并能使其下降，其理论为抑制人类肥胖和减肥具有重要的理论指导价值。

本项目研究了纯品c9,t11 CLA和t10,c12 CLA导致奶牛低乳脂综合征的分子机理。试验采用组织块法体外分离鉴定奶牛乳腺上皮细胞，用0、50、100和150μM的CLA作用于乳腺上皮细胞，采用MTT法检测细胞存活率，用显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡情况，用QRT-PCR定量测定乳腺上皮细胞脂肪合成相关基因mRNA的转录水平。研究结果表明：体外培养的乳腺商品细胞具有典型的上皮特性，角蛋白18检测为阴性，细胞生长曲线呈“S”型，细胞群体倍增时间为32.18h；两种高浓度（150μM）的CLA均抑制细胞增殖、促进细胞凋亡；50μM的c9,t11 CLA显著抑制乳腺上皮细胞ACC、FAS、D5去饱和酶和D6去饱和酶基因mRNA的转录水平（P＜0.05），而150μM却显著促进上述酶基因mRNA的转录水平（P＜0.05）；50μM的t10,c12 CLA显著促进ACC、SCD5、D5和D6酶mRNA的转录水平（P＜0.05），但对FAS无影响，在150μM时，上述酶基因mRNA转录均显著抑制（P＜0.05）；不同浓度的两种CLA均显著抑制SCD1转录水平，但显著促进SCD5的转录水平（150μM t10, c12 CLA除外）；c9,t11 CLA显著提升细胞中SCD指数（P＜0.05），而t10,c12 CLA则显著降低SCD指数（P＜0.05）；50-150μM的两种CLA均显著降低LPL基因mRNA转录水平（P＜0.05）；50μM的c9, t11 CLA显著降低CD36基因mRNA的转录水平（P＜0.05），而150μM的c9,t11 CLA却增加其转录水平（P＜0.05），CD36 mRNA的转录水平随t10,c12-CLA浓度增加呈显著上升趋势（P＜0.05）；150μM c9,t11 CLA可显著增加ACBP的转录水平（P＜0.05），t10,c12 CLA增加ACBP mRNA转录水平；两种CLA均显著降低FABP3基因mRNA的转录水平（P＜0.05），150μM的两种CLA都显著提升AGPAT的转录水平（P＜0.05）；两种CLA均降低乳腺上皮细胞内甘油三酯含量。由此可见CLA导致低乳脂综合征不仅与其抑制乳腺细胞增值有关，而且与脂肪酸合成、甘油三酯合成、脂肪酸转运关键酶的基因表达有关。本研究结果为将来实现调控乳腺脂肪合成提供理论依据和技术支撑。