番荔枝内酯抗肿瘤作用及调节肿瘤耐药分子调控网络研究

肿瘤细胞的抗凋亡及多药耐药是肿瘤复发及复发后化疗抵抗、造成复治失败从而造成患者死亡的主要原因。我国所独有的中药番荔枝内酯（annonaceous acetogenin ）有较明确的抗肿瘤作用，包括促肿瘤细胞凋亡及逆转肿瘤细胞多药耐药作用，但其作用机制及分子调控网络目前不明确。探索其作用机制，明确其调控肿瘤细胞的分子途径，对了解肿瘤复发机制及复发后治疗或增加对化疗药物的敏感性，逆转对化疗药物的耐受从而增强疗效有非常重要的现实意义。我们利用地域优势，选择我国富产番荔枝的福建省生长的番荔枝，提取其有效成分番荔枝内酯，利用细胞实验及动物模型观察其在促肿瘤细胞凋亡及逆转多药耐药的作用并进一步探索其作用机理，期望为肿瘤的治疗提供一种新的方法及思路；同时发挥祖国传统药物在肿瘤治疗中毒副作用小，疗效确切的特点，在恶性肿瘤的中西医结合治疗中积累经验。

观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌细胞A549和人肺鳞癌细胞SK-MES-1增殖的抑制作用及促凋亡作用；探讨squamocin促肿瘤细胞凋亡的机制。. 1、采用MTT法检测不同浓度的squamocin干预A549细胞和SK-MES-1细胞24、48、72h后，各组细胞的增殖情况，并计算各组细胞的增殖抑制率和样品的半数抑制浓度（IC50）。结果显示：squamocin在体外对A549细胞的增殖具有抑制作用，且抑制作用与浓度之间呈现剂量效应正相关；squamocin在体外对SK-MES-1细胞的体外增殖具有一定的抑制作用，其抑制率随着自身浓度的升高有所增强。. 2、采用流式细胞仪技术检测squamocin干预A549细胞和SK-MES-1细胞24、48、72h后，各组细胞凋亡率的变化。检测结果显示：squamocin在体外对A549细胞有促凋亡作用，并且随着时间的延长，细胞的凋亡率增加，各实验组的A549细胞凋亡率之间及与阴性对照组凋亡率的比较有显著性差异（P<0.01）；squamocin在体外对SK-MES-1细胞有一定的促凋亡作用。. 3、采用Western blot技术检测squamocin干预A549细胞12、24、48h后，各组细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2表达的变化。实验发现：squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、凋亡诱导基因Bax的表达上调（P<0.05），抑制细胞凋亡基因Bcl-2的表达则明显下调（P<0.05），差异有统计学意义。.通过以上实验，我们认为squamocin能较有效地抑制A549细胞和SK-MES-1细胞的增殖；其中，A549细胞对squamocin的抑制作用较敏感，而SK-MES-1细胞对squamocin的抑制作用不敏感；squamocin可能是通过促进肿瘤细胞凋亡来抑制肺癌细胞的增殖，其促凋亡机制可能与促进凋亡基因蛋白Bax的表达，同时下调Bcl-2的表达，进而上调caspase-3的表达有关。. 通过本课题，我们培养了医学硕士临床型1名，科研型2名，并发表了相关论文。目前该课题的后续研究也在进行中。