新型免疫调节分子Tim-3在围产期缺氧缺血性脑损伤中的作用及其分子机制

围产期缺氧缺血性脑损伤（HIBD）机制不明，脑缺氧缺血导致的炎症免疫损伤机制日益受到关注。Tim-3是近期发现的新型免疫调节分子，参与多种炎症相关性疾病的发生。申请者在前期研究中首次发现，窒息史新生儿脐带血单核细胞Tim-3表达水平显著高于正常新生儿。缺氧缺血可诱导小鼠脑内Tim-3 mRNA表达明显上调，Tim-3蛋白优势表达于CD11b+细胞（活化的小胶质细胞/单核巨噬细胞）。我们推测，Tim-3可能通过调控单核/巨噬细胞系统的功能在HIBD中发挥重要调节作用。本研究拟通过临床标本，动物实验和体外细胞模型，利用基因转染、抗体阻断和基因敲除等多种方法揭示Tim-3在HIBD中的调节作用，并对Tim-3调控单核/巨噬细胞系统的分子机制进行探讨。本研究的实施与完成，有望为新生儿缺氧缺血性脑病的早期诊断及预后评价提供新的更有价值的检测指标，为其临床治疗寻找新的作用靶点。

炎症反应在围产期缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中发挥重要作用。T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3 (Tim-3)作为新型免疫调节分子，显示出潜在的治疗作用，但其在HIBD中的作用及其机制研究尚属首次。本研究利用临床标本、体内及体外缺氧缺血再灌注实验模型，通过检测Tim-3及多种炎性因子的表达及构建Tim-3过表达及Tim-3敲减细胞模型，正、反双向论证了Tim-3在围产期缺氧缺血性脑损伤中的作用及其机制。.临床实验部分，检测窒息史新生儿脐动脉血不同亚群血细胞上Tim-3的表达，及血清中炎性细胞因子的表达。根据病史、临床表现与颅脑MRI结果将窒息组患儿进行临床分度，随访神经运动及智能发育情况。首次发现窒息患儿脐动脉血单核细胞Tim-3阳性表达率升高，与炎性细胞因子水平及临床分度呈正相关，与患儿发育商呈负相关，且Tim-3较炎性细胞因子更早，更准确地预测脑损伤程度。对单核细胞Tim-3高表达的患儿应早期采取更加有效的措施减轻炎症反应可有效地改善预后。.基础实验部分，通过构建HIBD动物模型及Tim-3过表达细胞模型及Tim-3敲减细胞模型，从组织、细胞及分子等水平进一步探究Tim-3在HIBD中的作用机制。研究首次发现：1、缺氧缺血刺激促进脑内Tim-3表达显著升高，并与脑损伤程度呈正相关。给予小鼠不同程度缺氧缺血刺激，通过病理组织学分析、凋亡检测等方法判断神经元损伤程度；同时检测脑内Tim-3的表达，发现缺氧缺血诱导的脑损伤与Tim-3表达之间存在正相关。2、活化小胶质细胞是脑内Tim-3的主要来源。3、Tim-3对小胶质细胞功能的调控机制研究。本研究利用Tim-3过表达质粒及小干扰RNA，研究Tim-3对LPS/缺氧缺血再复灌介导的小胶质细胞分泌细胞因子及NO功能的影响。研究发现，Tim-3可通过NF-κB途径，增强小胶质细胞中TNF-α，IL-1β等促炎因子及iNOS的表达，介导缺氧缺血再灌注后脑内的炎症反应。.综上所述，本研究首次发现：Tim-3通过促进单核/小胶质细胞系统分泌促炎因子参与了围产期缺氧缺血诱导的炎症反应，并与脑损伤程度正相关；监测窒息患儿脐动脉血单核细胞Tim-3的表达水平，为新生儿缺氧缺血性脑病的超早期诊断与预后评价提供了新的有价值的检测指标；对Tim-3高表达的患儿应尽早采取更加有效的措施减轻炎症反应以改善预后。