基于PI3K/AKT及Notch信号通路回药爱康方对非小细胞肺癌作用机制的研究

In back to the past Hui medicine Aikang Fang, on the basis of clinical and experimental research,this topic is proposed to choose three different non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines(human lung adenocarcinoma A549 cell line and human lung squamous carcinoma cell lines and mice SK - MES - 1 Lewis lung cancer cell line);Using two-dimensional gel electrophoresis and flow cytometry instrument test, Western blot and RT-PCR method,Through the in vivo and in vitro experiments, the following research:(1)Observation on the back to medicine aikang party PI3K/AKT signaling pathway;(2)Observe the Notch on the back to medicine aikang party and its receptor Notch1, Notch2, Notch3 and Notch4 protein expression;(3)Observe the party for Bad, caspase - 9, survivn, mTOR factor expression.Further study on the side to adjust the mechanism of action of cancer cell signal transduction pathways and the influence of the induction of apoptosis, as will back medicine aikang development for national medicine (in preparation) to lay the solid foundation.

在以往回药爱康方临床和实验研究的基础上,本课题拟选用三种不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株（人肺腺癌A549细胞株、人肺鳞癌SK-MES-1细胞株和小鼠Lewis肺癌细胞株）；采用双向凝胶电泳、流式细胞仪检测法、Western blot和RT-PCR法,通过体内和体外实验，进行以下研究:(1)观察回药爱康方对PI3K/AKT信号通路影响；(2)观察回药爱康方对Notch通路及其受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4蛋白表达；(3)观察该方对Bad、caspase-9、survivn、mTOR因子表达影响。进一步研究该方对调节癌细胞信号转导通路的作用机制和诱导细胞凋亡的影响，为将回药爱康方开发为民族医药（院内制剂）奠定坚实的基础。

在以往回药爱康方临床和实验研究的基础上,本课题选用三种不同非小细胞肺癌（NSCLC）细胞株；采用双向凝胶电泳、流式细胞仪检测法、Western blot和RT-PCR法,通过体内和体外实验，进行以下研究:(1)观察回药爱康方对PI3K/AKT信号通路影响；(2)观察回药爱康方对Notch通路及其受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4蛋白表达；(3)观察该方对Bad、caspase-9、survivn、mT OR因子表达影响。现研究部分结果如下：1.臭壳虫含药血清能够诱导 A549 细胞的凋亡，且凋亡率随着剂量升高而上升，并和时间呈正相关性。臭壳虫高剂量组的作用最强，作用 72h 后，细胞凋亡率可达21.9%。结论臭壳虫含药血清能够诱导人肺腺癌 A549 细胞发生凋亡。2.（1）爱康方及爱康方协同环磷酰胺可降低人肺腺癌 A549 细胞、小鼠 Lewis 细胞 PI3K、AKT、p-AKT 蛋白的表达，作用效果呈现出一定的时效性和剂量依赖性；（2）爱康方及爱康方协同环磷酰胺可降低人肺腺癌 A549 细胞、小鼠 Lewis 细胞 PI3K、AKT mRNA 水平；（3）爱康方可能通过抑制 1.PI3K/AKT 信号转导途径促进细胞的凋亡，这可能是抗非小细胞肺癌的作用途径之一。3.（1）爱康方以及爱康方协同环磷酰胺能够使人肺腺癌 A549、小鼠 Lewis 细胞内 Bad、Caspase-9 蛋白及基因表达水平上调，Survivin、mTOR 蛋白及基因表达水平下调。（2）爱康方能够促进人肺腺癌 A549、小鼠 Lewis 细胞凋亡，并与环磷酰胺起到协同作用，其机制可能是：①与调节凋亡相关蛋白 Bad、Caspase-9、Survivin 的表达相关；②通过下调mTOR蛋白的表达，抑制 PI3K/AKT-mTOR 信号通路在肺癌细胞中的异常活化，从而促进细胞凋亡，同时减轻环磷酰胺的耐药水平，且凋亡程度与时间相关。4.（1）爱康方及爱康方协同环磷酰胺可以提高人肺鳞癌 SK-MES-1 细胞中 Caspase-9 和Bad 蛋白表达和 mRNA 水平。（2）爱康方及爱康方协同环磷酰胺可以降低人肺鳞癌 SK-MES-1 细胞中 Survivin 和mTOR 蛋白表达和 mRNA水平。