pparγ通过调节肝肠循环影响胆固醇结石形成的机制研究

Pparγ is a member of the nuclear receptor transcription factor superfamily responding for regulating target gene expression. It is widely expressed in the liver, gallbladder and small intestine in addition to fat tissue. However,little is known about the relationship between pparγ and cholesterol gallstone formation so far. Our preliminary studies suggested activation of pparγ could prevent diet-induced cholesterol gallstone formation in mice, but the specific mechanism remained to be further discussed. Therefore we assume, activation of pparγ may adjust enterohepatic circulation metabolism of cholesterol and bile acid salt, and further lead to changes of bile composition, so as to prevent cholesterol gallstone formation. To confirm this hypothesis, we will use the human normal liver cells（L02）, gallbladder epithelial cells (HGBEC), intestinal mucosa epithelial cells (NCM460) and guinea pig cholesterol gallstone model, adopting such methods as adenovirus vector transfection, Elisa， western blot, real - time PCR and FCM，to investigate whether activation of pparγinvolved in the enterohepatic circulation metabolic regulation of cholesterol and bile salt by ppar gamma - LXR/FXR - ABCG pathways from the overall level of the molecules, cells, tissues and animals,and then further reveals the mechanism of prevention of cholesterol calculus formation.

pparγ是调节目标基因表达的核受体转录因子超家族成员，除了脂肪组织还可以在肝脏、胆囊及小肠广泛表达，但是目前关于pparγ与胆固醇结石形成之间的关系知之甚少。我们的预实验结果提示激动pparγ能够预防饮食诱导的小鼠胆固醇结石形成，其中的具体机制有待于进一步探讨。为此我们假设，激动pparγ可能通过改变胆固醇及胆汁酸盐的肝肠循环代谢，进一步导致胆汁成分改变，从而起到预防结石形成的作用。为验证这一假说，我们将通过人正常肝细胞株（L02）、胆囊上皮细胞株（HGBEC）、小肠粘膜上皮细胞（NCM460）及豚鼠胆固醇结石模型，采用腺病毒载体转染、Elisa、western blot、real-time PCR、FCM等手段，从分子、细胞、组织及动物整体水平等多方面研究激动ppar通过pparγ-LXR/FXR-ABCG途径参与胆固醇和胆盐的肝肠循环代谢调节，进一步揭示其防治胆固醇结石形成的机制。

利用人正常肝细胞株（L02）、胆囊上皮细胞株（HGBEC）、小肠粘膜上皮细胞（NCM460）及豚鼠胆固醇结石模型，通过腺病毒载体转染、Elisa、western blot、real-time PCR、FCM等手段，从分子、细胞、组织及动物整体水平等多方面研究激动ppar通过pparγ-LXR/FXR-ABCG途径参与胆固醇和胆盐的肝肠循环代谢调节。我们发现转染pcDNA3.1-PPARγ质粒L02细胞PPARγ表达水平极显著升高（P<0.01），细胞内外胆固醇含量极显著或显著降低（P<0.01，P<0.05），HMGCR及SREBP-2表达水平显著下降（P<0.05），CYP7A1、ABCG5、ABCG8及LXRα表达水平显著或极显著升高（P<0.05，P<0.01）。pcDNA3.1-PPARγ质粒能抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6及NF-κB p65增加；上调CCK-AR、ABCG5及ABCG8的表达，而NF-κB p65抑制剂PDTC能上调ABCG5及ABCG8的表达却不能上调CCK-AR的表达。pcDNA3.1-PPARγ质粒能显著降低HIEC的胆固醇摄取水平；下调HMGCR、SREBP-2、NPC1L1及ACAT2蛋白和mRNA表达；上调PPARγ、ABCG5及ABCG8蛋白和mRNA表达。吡格列酮能显著抑制LD引起的胆固醇结石；改变胆汁组成：降低胆固醇含量以及升高胆汁酸含量；降低血清中血糖、胰岛素、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平，并升高高密度脂蛋白胆固醇水平；抑制LD引起的肝脏病变和胆囊炎症；吡格列酮还能下调HMGCR、SREBP-2、ACAT2及NPC1L1表达；上调CYP7A1、 ABCG5、ABCG8、BSEP 、PPARγ及LXRα的表达。这些结果表明，PPARγ过表达通过抑制肝脏胆固醇合成、促进其分解和转运而降低细胞内外胆固醇水平。PPARγ过表达通过抑制NF-κB p65促进胆固醇的转运从而抑制胆囊炎发生。PPARγ过表达可以抑制肠道胆固醇吸收并促进其外排。本实验揭示pparγ干预胆固醇的肝肠循环及胆固醇结石形成的机制，为临床预防胆固醇结石提供了新的治疗靶点。