基于TCRVβCDR3谱型变化的健脾解毒方抗肝癌的免疫识别机制研究

我们通过临床实践构建的健脾解毒方可改善中晚期肝癌患者的生存质量，延缓病情进展，实验研究证明其可显著延长肝癌裸鼠的生存时间、抑制荷瘤鼠体能衰竭而实现带瘤生存。目前虽已注意到健脾解毒法有益于肝癌机体的免疫力改善，但是其对免疫识别机制具体变化的作用还不清楚。T细胞受体（TCR）可变区β链第三互补决定区（CDR3）是免疫识别的核心区；MAPK下游的ERK1/2是T细胞增殖的关键途径。课题拟通过免疫扫描谱型分析检测健脾解毒方干预的脾虚型大鼠肝癌模型脾脏单个核细胞26个TCRVβCDR3亚家族谱型变化；通过western blot、免疫组化检测各组肝癌大鼠脾脏单个核细胞中ERK1/2表达水平；探索本方抗肝癌的免疫识别机制及该机制与本方抗肝癌疗效的关系。本研究对于阐明健脾解毒方抗肝癌的免疫识别机制并以此为基础深入研究本方抗肝癌的肿瘤免疫机制，阐明带瘤生存的基础理论并指导临床实践有重要意义。

本研究结果达到预期。.研究表明脾气亏，痰瘀毒结是肝癌的基本病机，前期研究提示我们按照健脾解毒法构建的健脾解毒方可以提高肝癌患者的生存质量，延长荷瘤鼠的带瘤生存时间。中医药抗肝癌的优势在于整体作用，综合抗癌效果明显，符合癌症治疗的规律。为了探索健脾解毒方抗肝癌治疗除肝癌本身以外的作用机制，本研究从免疫识别的角度探讨健脾解毒方对免疫功能的作用，对上述问题进行探索。研究获得如下结果：.成功制备脾虚肝癌大鼠模型，并发现小承气汤的造模作用优于大承气汤。健脾解毒方可以有效延长脾虚肝癌模型的带瘤生存时间和减轻移植性肝癌的生长。基于主要组织相容性复合体MHCⅠ/Ⅱ蛋白的研究提示健脾解毒方对脾虚肝癌模型免疫递呈有良性调节作用。基于细胞增殖信号ERK1/2/pERK1/2的研究提示健脾解毒方可能促进正常肝组织的增殖而抑制肝癌的增殖。基于细胞增殖信号ERK1/2/pERK1/2，TCR蛋白的研究提示健脾解毒方可能对外周单个核细胞中T细胞的分化增殖或抑制消耗有一定促进作用。基于脾虚肝癌大鼠胸腺、肝脏、肝癌组织TCRVβCDR3基因谱多样性、表达强度的研究，提示健脾解毒方治疗脾虚肝癌模型可以明显提高大鼠胸腺、肝脏组织TCRVβCDR3基因谱多样性、表达强度，以改善机体免疫识别功能。.综合上述结果，我们认为健脾解毒方治疗肝癌的机制在于提高机体的整体抗癌能力进而控制肝癌的进展，并与免疫功能关系密切，而其优势不在于直接杀伤肝癌本身。基于这些研究结果，有望在将来进一步探明健脾解毒方对免疫识别改善的内在机制，有效提高健脾解毒法治疗肝癌的疗效。.研究经费按原计划合理支出。完成研究论著8篇，已发表2篇英文论著和2篇中文论著，接受待刊中英文各1篇，1篇英文论著和1篇中文论著已投稿评审中。广东省中西医结合学会肝病专业委员会年会学术报告1次。在此基金的资助下培养博士研究生1名，硕士研究生2名，均通过答辩获得学位。