维生素D受体在腹膜间皮细胞转分化中的作用及分子机制研究

Peritoneal fibrosis is a serious complication in long-term peritoneal dialysis, which lead to ultrafiltration failure. Epithelial to mesenchymal transition (EMT) is the initiating factor and plays an important role in peritoneal fibrosis. vitamin D receptor(VDR) , a regulatory protein of genetic transcription, which is proved to be protective on inflammation and fibrosis of peritoneal mesothelial cells by our previous study. On the basis of our earlier work, we build the model of EMT in vitro and in vivo. RT-PCR, Western blot and Immunohistochemistry will be used to test the gene and protein level of VDR,TGF-β,IL-6,E-cadherin,α-SMA,FN, 1,25(OH)2D3 will be used to up-regulate the expression of VDR to observe the change of EMT, the morphological changes of rat peritoneum, apoptosis and autophagy. RNAi will be used to down-regulate the expression of VDR to observe the change of EMT, the morphological changes of rat peritoneum, apoptosis and autophagy. The regulation of TGFβ/Smad signal pathway will be observed in the regulation of EMT. The target of VDR signal pathway will be observed to illuminate the mechanism of anti-fibrosis effect.We believe such an investigation could be of particular clinical value in the field of mechanism and prevention of ultrafiltration failure.

腹膜纤维化致超滤丧失是腹膜透析失败的主要原因。上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)是腹膜纤维化过程中的始动因素。维生素D受体(VDR)是一种基因转录调节蛋白，我们曾证实其与腹膜炎症及纤维化因子呈负相关。本项目在既往工作基础上，利用体内外大鼠腹膜EMT模型，采用RT-PCR、Western blot、免疫组化等方法检测VDR、TGF-β、IL-6、E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的基因、蛋白表达以及应用VDR的配体1,25(OH)2D3上调VDR表达后EMT的变化及对腹膜间皮细胞形态学变化、凋亡及自噬的影响；采用siRNA干扰，研究VDR基因下调后EMT变化及腹膜间皮细胞形态学变化、凋亡及自噬的影响以及TGFβ/Smad信号通路在腹膜EMT中的调控作用。进一步观察VDR调控该信号转导通路中的作用靶点，探讨其抗腹膜纤维化的细胞分子机制，以期探寻腹膜失超滤的新机制和防治的新策略。

腹膜纤维化致超滤丧失是腹膜透析失败的主要原因。上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)是腹膜纤维化过程中的始动因素。维生素D受体(VDR)是一种基因转录调节蛋白，我们曾证实其与腹膜炎症及纤维化因子呈负相关。本项目在既往工作基础上，利用体内外腹膜EMT模型，采用RT-PCR、Western blot、免疫组化等方法检测VDR、TGF-β、IL-6、E-cadherin、α-SMA、FN等信号分子的基因、蛋白表达以及应用VDR的配体1,25(OH)2D3上调VDR表达后EMT的变化及对腹膜间皮细胞炎症、凋亡及自噬的影响；采用shRNA干扰，研究VDR基因下调后EMT变化及腹膜间皮细胞炎症、凋亡及自噬的影响以及TGFβ/Smad信号通路在腹膜EMT中的调控作用。体内及体外研究结果表明：1.高糖以浓度及时间依赖的方式诱导人腹膜间皮细胞及小鼠腹膜组织发生EMT, EMT与VDR表达负相关。2.高糖亦能够导致人腹膜间皮细胞及小鼠腹膜组织炎症、凋亡及自抑制的发生。3.应用1,25(OH)2D3上调VDR表达后能够部分逆转EMT、炎症、凋亡及自噬抑制的发生，应用VDRshRNA下调VDR表达能够加剧EMT、炎症、凋亡的发生。4.并且发现VDR能够通过TGFβ/Smad通路影响EMT的发生，P38通路参与了凋亡的调控，mTOR通路参与了自噬的调控。本研究揭示了VDR发挥腹膜保护的作用靶点及其抗腹膜纤维化的细胞分子机制，为改善腹膜失超滤提供了新机制和防治的新策略。