PDGF-B促血管周细胞募集抑制肾癌转移的机制研究

转移性肾癌的治疗是当今的难题。前期研究表明，肾癌新生血管存在明显的周细胞分布缺陷现象，而缺乏周细胞的未分化型血管密度与肾癌转移明显相关；基因芯片数据提示，周细胞募集相关基因PDGF-B 在转移性肾癌中表达下调最明显。据此，我们提出PDGF-B 低表达与新生血管成熟障碍及肾癌转移有密切关系的假设。本项目拟在组织水平，明确PDGF-B 与肾癌新生血管分化成熟及肿瘤转移的关系；通过增强肾癌细胞PDGF-B表达，探讨其对周细胞迁移能力的影响，建立PDGF-B过表达肾癌小鼠模型，研究其对周细胞募集、血管分化成熟和肾癌增殖转移能力的影响；通过蛋白组学/生物信息学方法筛选与PDGF-B调控 血管成熟功能相关蛋白，揭示PDGF-B促使周细胞在血管周围募集并抑制肾癌转移的分子机制。本项目既为深化前期研究结果提供分子机制依据，也对探索以促进新生血管"正常化"为方向的肿瘤抗血管生成治疗研究具有重要理论意义。

新生血管生成最终依赖干细胞来源的周细胞募集和定向分布形成成熟血管。血小板衍生生长因子（PDGF）-BB过表达促进周细胞募集到血管壁,从而增加肿瘤血管的稳定性，同时周细胞募集可导致抗血管新生药物的耐药,因而联合针对内皮细胞和周细胞的联合靶向治疗已经提出。然而前期研究表明，肾癌新生血管存在明显的周细胞分布缺陷现象，而缺乏周细胞的未分化型血管密度与肾癌转移明显相关。在本研究中，我们旨在评估由PDGF-BB介导的周细胞募集在肾细胞癌肿瘤生长和进展的作用。. 首先，明确人肾癌组织中 PDGF-B 表达与周细胞包绕率的关系。分析CD34及PDGF-B在的表达，及其表达水平与病理分级、预后及转移等变量的关系。通过体内及体外实验探讨 PDGF-B 过表达肾癌细胞对于周细胞募集、血管成熟以及肿瘤转移作用以及可能的分子生物学机制。体外实验通过增强肾癌细胞PDGF-B 表达，研究PDGF-B对肿瘤细胞本身增殖能力的影响；Western-blot 分析周细胞和内皮细胞PDGFRβ蛋白磷酸化水平；FCM测定PDGF-B 对细胞增殖的影响；迁移实验观察细胞迁移能力的改变；管腔形成实验分析对细胞体外形成血管结构的影响。进而建立PDGF-B 过表达肾癌小鼠模型，研究其对肿瘤细胞体内增殖和转移的影响。微阵列分析探讨Van Andel研究所中肾透明细胞癌患者的PDGFB / PDGFR基因在预后不同的组间的表达。PDGF-B的表达量的多少与血管周细胞包绕率成正相关。PDGF-B的表达与成熟微血管密度成正相关。PDGF-B表达量越低，肿瘤直径越大，肿瘤的病理分级及临床分期越高，且肿瘤越容易出现远处转移，肿瘤病人的生存预后越差。体外实验证实PDGF-BB过表达使周细胞的增殖、迁移及形成能力增强从而增加周细胞募集。最后，体内实验证实PDGF-B 高表达可减少肿瘤生长和进展的发生。. 肾癌属于富血管型肿瘤，对于肾癌细胞调节周细胞迁移与分布，及其与肿瘤转移关系的研究尚不多。随着人们对肿瘤-宿主微环境相互作用认识逐步深入，修复血管内皮外周微环境，促进新生血管“正常化”，成为抗肿瘤血管生成治疗的新热点。因此，探索PDGF-B 在肾癌血管成熟过程中的作用，为肾癌抗血管生成治疗提供新的机制和研究切入点。我们研究表明针对周细胞的靶向治疗在肿瘤治疗中存在争议,需进一步研究其在不同肿瘤微环境中作用。