钙离子通道TRPV6在破骨细胞中的表达、功能及其影响因素的研究

破骨细胞性骨吸收是引起牙种植体周围骨质吸收及牙周炎引起的牙槽骨吸收的主要原因，骨基质降解产物Ca2+的转运在破骨细胞性骨吸收过程中起着关键作用。本课题拟首次通过Western blot和RT-PCR证实Ca2+通道TRPV6在破骨细胞（OC）上的表达，通过免疫荧光确定Ca2+通道TRPV6在功能状态破骨细胞上的位置，通过RNA干扰技术明确Ca2+通道TRPV6在破骨细胞上的功能，并进一步研究Ca2+抑制剂、种植体材料、流体剪切力等对破骨细胞Ca2+通道TRPV6表达及功能的影响，从而进一步阐明破骨细胞的骨吸收机制及影响因素，为口腔临床上预防和治疗破骨细胞性骨吸收疾病提供新的实验依据和思路。

破骨细胞 (osteoclast，OC)是引起骨吸收的主要细胞。钙离子通道参与了破骨细胞的骨吸收功能和骨基质的降解，在骨基质的降解中起着关键作用。近来已经证明，TRPV5和TRPV6是促进跨细胞钙离子转运的三步过程中的一部分。已有学者证实TRPV5在破骨细胞上表达并在骨吸收中有着重要作用。因此，本研究报道了另一类型的钙离子通道TRPV6在破骨细胞上的表达并初步探讨了其在破骨细胞骨吸收中的作用。本课题采用骨髓单核细胞和骨髓间充质细胞联合培养来获得破骨细胞，通过Western blot和免疫荧光检测Ca2+通道TRPV6蛋白在破骨细胞上的表达，并与TRPV5做对照，同时也检测了TRPV6在骨髓间充质干细胞上的蛋白表达量的大小。通过RT-PCR确定Ca2+通道TRPV6 mRNA在功破骨细胞内的表达，并同时检测了相关Ca2+转运关键因子D28K，D9K，NCX1的mRNA的表达情况。 此外，还进一步研究Ca2+通道抑制剂Miconazole对破骨细胞在钛表面羟基磷灰石涂层上的骨吸功能的研究。免疫荧光及Western blot 结果证实TRPV6蛋白在破骨细胞上表达，但与TRPV5相比，其表达量较低。同时，以骨髓间充质干细胞做对照， RT-PCR也证实，TRPV6在破骨细胞上的表达也低于在骨髓间充质干细胞中的表达量, 而且钙离子转运的辅助因子D28K，D9K，NCX1的相对表达量也高于TRPV6，说明这些因子主要是辅助TRPV5进行钙离子转运，在TRPV6的钙离子转运中作用并不大。钙离子通道抑制Miconazole实验证明，Miconazole能减少破骨细胞在羟基磷灰石涂层上的吸收面积。本研究免疫荧光证实TRPV6在破骨细胞内表达存在，但TRPV6蛋白在破骨细胞内表达的量不多，但对其钙离子转运作用有限。